304 ಸ್ಟೇನ್‌ಲೆಸ್ ಸ್ಟೀಲ್ ಕಾಯಿಲ್ ಟ್ಯೂಬಿಂಗ್ ರಾಸಾಯನಿಕ ಘಟಕ, SPACA6 ಎಕ್ಟೋಡೋಮೈನ್‌ನ ರಚನೆಯು ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಸಮ್ಮಿಳನಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಸಂರಕ್ಷಿತ ಸೂಪರ್‌ಫ್ಯಾಮಿಲಿಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ.

Nature.com ಗೆ ಭೇಟಿ ನೀಡಿದ್ದಕ್ಕಾಗಿ ಧನ್ಯವಾದಗಳು.ನೀವು ಸೀಮಿತ CSS ಬೆಂಬಲದೊಂದಿಗೆ ಬ್ರೌಸರ್ ಆವೃತ್ತಿಯನ್ನು ಬಳಸುತ್ತಿರುವಿರಿ.ಉತ್ತಮ ಅನುಭವಕ್ಕಾಗಿ, ನೀವು ನವೀಕರಿಸಿದ ಬ್ರೌಸರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲು ನಾವು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡುತ್ತೇವೆ (ಅಥವಾ ಇಂಟರ್ನೆಟ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ಲೋರರ್‌ನಲ್ಲಿ ಹೊಂದಾಣಿಕೆ ಮೋಡ್ ಅನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಿ).ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ನಡೆಯುತ್ತಿರುವ ಬೆಂಬಲವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು, ನಾವು ಶೈಲಿಗಳು ಮತ್ತು JavaScript ಇಲ್ಲದೆ ಸೈಟ್ ಅನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತೇವೆ.
ಪ್ರತಿ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗೆ ಮೂರು ಲೇಖನಗಳನ್ನು ತೋರಿಸುವ ಸ್ಲೈಡರ್‌ಗಳು.ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳ ಮೂಲಕ ಚಲಿಸಲು ಹಿಂದಿನ ಮತ್ತು ಮುಂದಿನ ಬಟನ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ ಅಥವಾ ಪ್ರತಿ ಸ್ಲೈಡ್ ಮೂಲಕ ಚಲಿಸಲು ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ ಸ್ಲೈಡ್ ನಿಯಂತ್ರಕ ಬಟನ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ.

SPACA6 ಎಂಬುದು ವೀರ್ಯ-ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಿದ ಮೇಲ್ಮೈ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಆಗಿದ್ದು, ಇದು ಸಸ್ತನಿಗಳ ಲೈಂಗಿಕ ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಸಮ್ಮಿಳನಕ್ಕೆ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ.ಈ ಮೂಲಭೂತ ಪಾತ್ರದ ಹೊರತಾಗಿಯೂ, SPACA6 ನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಸರಿಯಾಗಿ ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲಾಗಿಲ್ಲ.ನಾವು SPACA6 ನ ಬಾಹ್ಯಕೋಶೀಯ ಡೊಮೇನ್‌ನ ಸ್ಫಟಿಕ ರಚನೆಯನ್ನು 2.2 Å ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್‌ನಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸುತ್ತೇವೆ, ನಾಲ್ಕು-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಬಂಡಲ್ ಮತ್ತು Ig-ತರಹದ β- ಸ್ಯಾಂಡ್‌ವಿಚ್‌ಗಳಿಂದ ಕೂಡಿದ ಎರಡು-ಡೊಮೇನ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸುತ್ತೇವೆ.ಈ ರಚನೆಯು IZUMO1 ಅನ್ನು ಹೋಲುತ್ತದೆ, ಮತ್ತೊಂದು ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಸಮ್ಮಿಳನ-ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರೋಟೀನ್, SPACA6 ಮತ್ತು IZUMO1 ಅನ್ನು IST ಸೂಪರ್ ಫ್ಯಾಮಿಲಿ ಎಂದು ಉಲ್ಲೇಖಿಸಲಾದ ಫಲೀಕರಣ-ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಸೂಪರ್ ಫ್ಯಾಮಿಲಿಯ ಸ್ಥಾಪಕ ಸದಸ್ಯರನ್ನಾಗಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ.IST ಸೂಪರ್‌ಫ್ಯಾಮಿಲಿಯನ್ನು ಅದರ ತಿರುಚಿದ ನಾಲ್ಕು-ಹೆಲಿಕ್ಸ್ ಬಂಡಲ್ ಮತ್ತು ಒಂದು ಜೋಡಿ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ CXXC ಮೋಟಿಫ್‌ಗಳಿಂದ ರಚನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲಾಗಿದೆ.ಮಾನವ ಪ್ರೋಟೀಮ್‌ನ ರಚನೆ-ಆಧಾರಿತ ಆಲ್ಫಾಫೋಲ್ಡ್ ಹುಡುಕಾಟವು ಈ ಸೂಪರ್‌ಫ್ಯಾಮಿಲಿಯ ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸದಸ್ಯರನ್ನು ಗುರುತಿಸಿದೆ;ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ, ಈ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನವು ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಸಮ್ಮಿಳನದಲ್ಲಿ ತೊಡಗಿಕೊಂಡಿವೆ.SPACA6 ರಚನೆ ಮತ್ತು IST ಸೂಪರ್‌ಫ್ಯಾಮಿಲಿಯ ಇತರ ಸದಸ್ಯರೊಂದಿಗಿನ ಅದರ ಸಂಬಂಧವು ಸಸ್ತನಿಗಳ ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಸಮ್ಮಿಳನದ ನಮ್ಮ ಜ್ಞಾನದಲ್ಲಿ ಕಾಣೆಯಾದ ಲಿಂಕ್ ಅನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ.
ಪ್ರತಿ ಮಾನವ ಜೀವನವು ಎರಡು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಹ್ಯಾಪ್ಲಾಯ್ಡ್ ಗ್ಯಾಮೆಟ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಪ್ರಾರಂಭವಾಗುತ್ತದೆ: ತಂದೆಯ ವೀರ್ಯ ಮತ್ತು ತಾಯಿಯ ಮೊಟ್ಟೆ.ಈ ವೀರ್ಯವು ತೀವ್ರವಾದ ಆಯ್ಕೆ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ವಿಜೇತರಾಗಿದ್ದು, ಈ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಲಕ್ಷಾಂತರ ವೀರ್ಯ ಕೋಶಗಳು ಸ್ತ್ರೀ ಜನನಾಂಗದ ಮೂಲಕ ಹಾದುಹೋಗುತ್ತವೆ, ವಿವಿಧ ಅಡೆತಡೆಗಳನ್ನು ನಿವಾರಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಕೆಪಾಸಿಟೇಶನ್‌ಗೆ ಒಳಗಾಗುತ್ತವೆ, ಇದು ಅವುಗಳ ಚಲನಶೀಲತೆ ಮತ್ತು ಮೇಲ್ಮೈ ಘಟಕಗಳ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ 2,3,4.ವೀರ್ಯ ಮತ್ತು ಅಂಡಾಣುಗಳು ಪರಸ್ಪರ ಕಂಡುಕೊಂಡರೂ, ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ಇನ್ನೂ ಮುಗಿದಿಲ್ಲ.ಅಂಡಾಣುವು ಕ್ಯುಮುಲಸ್ ಕೋಶಗಳ ಪದರದಿಂದ ಸುತ್ತುವರಿದಿದೆ ಮತ್ತು ಝೋನಾ ಪೆಲ್ಲುಸಿಡಾ ಎಂಬ ಗ್ಲೈಕೊಪ್ರೋಟೀನ್ ತಡೆಗೋಡೆ, ಅದರ ಮೂಲಕ ವೀರ್ಯವು ಅಂಡಾಣುವನ್ನು ಪ್ರವೇಶಿಸಲು ಹಾದುಹೋಗಬೇಕು.ಈ ಅಂತಿಮ ಅಡೆತಡೆಗಳನ್ನು ನಿವಾರಿಸಲು ಸ್ಪೆರ್ಮಟೊಜೋವಾ ಮೇಲ್ಮೈ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವ ಅಣುಗಳು ಮತ್ತು ಪೊರೆ-ಸಂಬಂಧಿತ ಮತ್ತು ಸ್ರವಿಸುವ ಕಿಣ್ವಗಳ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ5.ಈ ಅಣುಗಳು ಮತ್ತು ಕಿಣ್ವಗಳು ಮುಖ್ಯವಾಗಿ ಒಳ ಮೆಂಬರೇನ್ ಮತ್ತು ಅಕ್ರೊಸೋಮಲ್ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಕ್ಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹವಾಗುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಅಕ್ರೊಸೋಮಲ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ವೀರ್ಯದ ಹೊರ ಪೊರೆಯು ಲೈಸ್ ಮಾಡಿದಾಗ ಪತ್ತೆ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ಈ ತೀವ್ರವಾದ ಪ್ರಯಾಣದ ಅಂತಿಮ ಹಂತವೆಂದರೆ ವೀರ್ಯ-ಮೊಟ್ಟೆಯ ಸಮ್ಮಿಳನ ಘಟನೆಯಾಗಿದೆ, ಇದರಲ್ಲಿ ಎರಡು ಜೀವಕೋಶಗಳು ತಮ್ಮ ಪೊರೆಗಳನ್ನು ಬೆಸೆದು ಒಂದೇ ಡಿಪ್ಲಾಯ್ಡ್ ಜೀವಿಯಾಗುತ್ತವೆ.ಈ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ಮಾನವ ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಅದ್ಭುತವಾಗಿದ್ದರೂ, ಅಗತ್ಯವಾದ ಆಣ್ವಿಕ ಸಂವಹನಗಳನ್ನು ಸರಿಯಾಗಿ ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲಾಗಿಲ್ಲ.
ಗ್ಯಾಮೆಟ್‌ಗಳ ಫಲೀಕರಣದ ಜೊತೆಗೆ, ಎರಡು ಲಿಪಿಡ್ ದ್ವಿಪದರಗಳ ಸಮ್ಮಿಳನದ ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರವನ್ನು ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ಪೊರೆಯ ಸಮ್ಮಿಳನವು ಶಕ್ತಿಯುತವಾಗಿ ಪ್ರತಿಕೂಲವಾದ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಾಗಿದ್ದು, ಪ್ರೋಟೀನ್ ವೇಗವರ್ಧಕವು ರಚನಾತ್ಮಕ ರೂಪಾಂತರ ಬದಲಾವಣೆಗೆ ಒಳಗಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಎರಡು ಪೊರೆಗಳನ್ನು ಹತ್ತಿರಕ್ಕೆ ತರುತ್ತದೆ, ಅವುಗಳ ನಿರಂತರತೆಯನ್ನು ಮುರಿಯುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸಮ್ಮಿಳನಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.ಈ ಪ್ರೋಟೀನ್ ವೇಗವರ್ಧಕಗಳನ್ನು ಫ್ಯೂಸೋಜೆನ್‌ಗಳು ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅಸಂಖ್ಯಾತ ಸಮ್ಮಿಳನ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬಂದಿವೆ.ಆತಿಥೇಯ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ವೈರಲ್ ಪ್ರವೇಶಕ್ಕೆ (ಉದಾಹರಣೆಗೆ, HIV-1 ರಲ್ಲಿ gp160, ಕರೋನವೈರಸ್ಗಳಲ್ಲಿ ಸ್ಪೈಕ್, ಇನ್ಫ್ಲುಯೆನ್ಸ ವೈರಸ್ಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಮಾಗ್ಗ್ಲುಟಿನಿನ್) 10,11,12 ಜರಾಯು (ಸಿನ್ಸಿಟಿನ್)13,14,15 ಮತ್ತು ಕೆಳಗಿನ ಯುಕಾರ್ಯೋಟ್ಗಳಲ್ಲಿ ಗ್ಯಾಮೆಟ್-ರೂಪಿಸುವ ಸಮ್ಮಿಳನಗಳು ( ಸಸ್ಯಗಳು, ಪ್ರೊಟಿಸ್ಟ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಆರ್ತ್ರೋಪಾಡ್‌ಗಳಲ್ಲಿ HAP2/GCS1) 16,17,18,19.ಮಾನವ ಗ್ಯಾಮೆಟ್‌ಗಳಿಗೆ ಫ್ಯೂಸೋಜೆನ್‌ಗಳನ್ನು ಇನ್ನೂ ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಗಿಲ್ಲ, ಆದಾಗ್ಯೂ ಹಲವಾರು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಲಗತ್ತಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಸಮ್ಮಿಳನಕ್ಕೆ ನಿರ್ಣಾಯಕವೆಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.ಮೌಸ್ ಮತ್ತು ಮಾನವ ಗ್ಯಾಮೆಟ್‌ಗಳ ಸಮ್ಮಿಳನಕ್ಕೆ ಅಗತ್ಯವಾದ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಮೆಂಬ್ರೇನ್ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಓಸೈಟ್-ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ರೆಸ್ಡ್ ಸಿಡಿ9 ಅನ್ನು ಮೊದಲು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಯಿತು 21,22,23.ಅದರ ನಿಖರವಾದ ಕಾರ್ಯವು ಅಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿಯೇ ಉಳಿದಿದ್ದರೂ, ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯಲ್ಲಿನ ಪಾತ್ರ, ಮೊಟ್ಟೆಯ ಮೈಕ್ರೋವಿಲ್ಲಿಯ ಮೇಲೆ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯ ರಚನೆ, ಮತ್ತು/ಅಥವಾ ಓಸೈಟ್ ಮೇಲ್ಮೈ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಸರಿಯಾದ ಸ್ಥಳೀಕರಣವು 24,25,26 ಎಂದು ತೋರುತ್ತದೆ.ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಸಮ್ಮಿಳನಕ್ಕೆ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿರುವ ಎರಡು ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳೆಂದರೆ ವೀರ್ಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ IZUMO127 ಮತ್ತು ಓಸೈಟ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ JUNO28, ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧವು ಸಮ್ಮಿಳನಕ್ಕೆ ಮುಂಚಿತವಾಗಿ ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಗುರುತಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖ ಹಂತವಾಗಿದೆ.ಗಂಡು Izumo1 ನಾಕ್‌ಔಟ್ ಇಲಿಗಳು ಮತ್ತು ಹೆಣ್ಣು ಜುನೋ ನಾಕ್‌ಔಟ್ ಇಲಿಗಳು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಬರಡಾದವು, ಈ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ವೀರ್ಯವು ಪೆರಿವಿಟೆಲೈನ್ ಜಾಗವನ್ನು ಪ್ರವೇಶಿಸುತ್ತದೆ ಆದರೆ ಗ್ಯಾಮೆಟ್‌ಗಳು ಬೆಸೆಯುವುದಿಲ್ಲ.ಅಂತೆಯೇ, ಗ್ಯಾಮೆಟ್‌ಗಳನ್ನು ಆಂಟಿ-IZUMO1 ಅಥವಾ JUNO27,29 ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳೊಂದಿಗೆ ಹ್ಯೂಮನ್ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಫರ್ಟಿಲೈಸೇಶನ್ ಪ್ರಯೋಗಗಳಲ್ಲಿ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಿದಾಗ ಸಂಗಮವನ್ನು ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು.
ಇತ್ತೀಚೆಗೆ, IZUMO1 ಮತ್ತು JUNO20,30,31,32,33,34,35 ಅನ್ನು ಹೋಲುವ ವೀರ್ಯ-ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಿದ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಹೊಸದಾಗಿ ಪತ್ತೆಯಾದ ಗುಂಪನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಗಿದೆ.ವೀರ್ಯ ಅಕ್ರೊಸೋಮಲ್ ಮೆಂಬರೇನ್-ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರೋಟೀನ್ 6 (SPACA6) ಅನ್ನು ದೊಡ್ಡ ಪ್ರಮಾಣದ ಮುರಿನ್ ಮ್ಯುಟಾಜೆನೆಸಿಸ್ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ ಫಲೀಕರಣಕ್ಕೆ ಅವಶ್ಯಕವೆಂದು ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ.Spaca6 ಜೀನ್‌ಗೆ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಜೀನ್‌ನ ಅಳವಡಿಕೆಯು ನಾನ್‌ಫ್ಯೂಸಿಬಲ್ ಸ್ಪೆರ್ಮಟೊಜೋವಾವನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ, ಆದಾಗ್ಯೂ ಈ ಸ್ಪರ್ಮಟಜೋವಾಗಳು ಪೆರಿವಿಟೆಲೈನ್ ಜಾಗವನ್ನು 36 ನುಸುಳುತ್ತವೆ.ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿನ ನಂತರದ ನಾಕ್ಔಟ್ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಫ್ಯೂಷನ್ 30,32 ಗೆ ಸ್ಪಾಕಾ6 ಅಗತ್ಯವಿದೆ ಎಂದು ದೃಢಪಡಿಸಿತು.SPACA6 ಅನ್ನು ಬಹುತೇಕವಾಗಿ ವೃಷಣಗಳಲ್ಲಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು IZUMO1 ನಂತೆಯೇ ಸ್ಥಳೀಕರಣದ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಅವುಗಳೆಂದರೆ ಆಕ್ರೊಸೋಮಲ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಮೊದಲು ಸ್ಪರ್ಮಟೊಜೋವಾದ ಒಳಭಾಗದೊಳಗೆ, ಮತ್ತು ನಂತರ ಆಕ್ರೊಸೋಮಲ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ 30,32 ನಂತರ ಸಮಭಾಜಕ ಪ್ರದೇಶಕ್ಕೆ ವಲಸೆ ಹೋಗುತ್ತದೆ.Spaca6 ಹೋಮೊಲಾಗ್‌ಗಳು ವಿವಿಧ ಸಸ್ತನಿಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಯೂಕ್ಯಾರಿಯೋಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಅಸ್ತಿತ್ವದಲ್ಲಿವೆ 30 ಮತ್ತು SPACA6 30 ಗೆ ಪ್ರತಿರೋಧದ ಮೂಲಕ ವಿಟ್ರೊದಲ್ಲಿ ಮಾನವ ಫಲೀಕರಣವನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುವ ಮೂಲಕ ಮಾನವ ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಸಮ್ಮಿಳನಕ್ಕೆ ಅದರ ಪ್ರಾಮುಖ್ಯತೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಲಾಗಿದೆ.IZUMO1 ಮತ್ತು JUNO ಗಿಂತ ಭಿನ್ನವಾಗಿ, SPACA6 ನ ರಚನೆ, ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳು ಮತ್ತು ಕಾರ್ಯದ ವಿವರಗಳು ಅಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿರುತ್ತವೆ.
ಮಾನವನ ವೀರ್ಯ ಮತ್ತು ಅಂಡಾಣುಗಳ ಸಮ್ಮಿಳನಕ್ಕೆ ಆಧಾರವಾಗಿರುವ ಮೂಲಭೂತ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು, ಇದು ಕುಟುಂಬ ಯೋಜನೆ ಮತ್ತು ಫಲವತ್ತತೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯಲ್ಲಿ ಭವಿಷ್ಯದ ಬೆಳವಣಿಗೆಗಳನ್ನು ತಿಳಿಸಲು ನಮಗೆ ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ, ನಾವು SPACA6 ರಚನಾತ್ಮಕ ಮತ್ತು ಜೀವರಾಸಾಯನಿಕ ಅಧ್ಯಯನಗಳನ್ನು ನಡೆಸಿದ್ದೇವೆ.SPACA6 ನ ಬಾಹ್ಯಕೋಶೀಯ ಡೊಮೇನ್‌ನ ಸ್ಫಟಿಕ ರಚನೆಯು ನಾಲ್ಕು-ಹೆಲಿಕಲ್ ಬಂಡಲ್ (4HB) ಮತ್ತು ಇಮ್ಯುನೊಗ್ಲಾಬ್ಯುಲಿನ್ ತರಹದ (Ig-ತರಹದ) ಡೊಮೇನ್ ಅನ್ನು ಅರೆ-ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುವ ಪ್ರದೇಶಗಳಿಂದ ಸಂಪರ್ಕಿಸುತ್ತದೆ.ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳಲ್ಲಿ ಊಹಿಸಿದಂತೆ, 7,32,37 SPACA6 ನ ಡೊಮೇನ್ ರಚನೆಯು ಮಾನವ IZUMO1 ನಂತೆಯೇ ಇರುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ಎರಡು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು ಅಸಾಮಾನ್ಯ ಮೋಟಿಫ್ ಅನ್ನು ಹಂಚಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ: 4HB ತ್ರಿಕೋನ ಹೆಲಿಕಲ್ ಮೇಲ್ಮೈ ಮತ್ತು ಒಂದು ಜೋಡಿ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ CXXC ಮೋಟಿಫ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ.IZUMO1 ಮತ್ತು SPACA6 ಈಗ ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಸಮ್ಮಿಳನಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ದೊಡ್ಡ, ರಚನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಸಂಬಂಧಿತ ಸೂಪರ್‌ಫ್ಯಾಮಿಲಿಯನ್ನು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ನಾವು ಪ್ರಸ್ತಾಪಿಸುತ್ತೇವೆ.ಸೂಪರ್‌ಫ್ಯಾಮಿಲಿಗೆ ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ವೈಶಿಷ್ಟ್ಯಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, ನಾವು ಆಲ್ಫಾಫೋಲ್ಡ್ ಸ್ಟ್ರಕ್ಚರಲ್ ಹ್ಯೂಮನ್ ಪ್ರೋಟಿಯೋಮ್‌ಗಾಗಿ ಸಮಗ್ರ ಹುಡುಕಾಟವನ್ನು ನಡೆಸಿದ್ದೇವೆ, ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಸಮ್ಮಿಳನ ಮತ್ತು/ಅಥವಾ ಫಲೀಕರಣದಲ್ಲಿ ತೊಡಗಿರುವ ಹಲವಾರು ಸದಸ್ಯರು ಸೇರಿದಂತೆ ಈ ಸೂಪರ್‌ಫ್ಯಾಮಿಲಿಯ ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಸದಸ್ಯರನ್ನು ಗುರುತಿಸಿದ್ದೇವೆ.ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಸಮ್ಮಿಳನಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಸಾಮಾನ್ಯ ರಚನಾತ್ಮಕ ಪಟ್ಟು ಮತ್ತು ಸೂಪರ್‌ಫ್ಯಾಮಿಲಿ ಇದೆ ಎಂದು ಈಗ ಕಂಡುಬರುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ನಮ್ಮ ರಚನೆಯು ಮಾನವ ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಸಮ್ಮಿಳನ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದ ಈ ಪ್ರಮುಖ ಅಂಶದ ಆಣ್ವಿಕ ನಕ್ಷೆಯನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ.
SPACA6 ಒಂದು ಎನ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ ಗ್ಲೈಕಾನ್ ಮತ್ತು ಆರು ಪುಟೇಟಿವ್ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಾಂಡ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಏಕ-ಪಾಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಮೆಂಬ್ರೇನ್ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಆಗಿದೆ (ಅಂಕಿ S1a ಮತ್ತು S2).ನಾವು ಡ್ರೊಸೊಫಿಲಾ S2 ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಮಾನವ SPACA6 (ಉಳಿಕೆಗಳು 27-246) ನ ಬಾಹ್ಯಕೋಶೀಯ ಡೊಮೇನ್ ಅನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ನಿಕಲ್ ಅಫಿನಿಟಿ, ಕ್ಯಾಷನ್ ಎಕ್ಸ್‌ಚೇಂಜ್ ಮತ್ತು ಗಾತ್ರದ ಹೊರಗಿಡುವ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ (Fig. S1b) ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ್ದೇವೆ.ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ SPACA6 ಎಕ್ಟೋಡೋಮೈನ್ ತುಂಬಾ ಸ್ಥಿರವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಏಕರೂಪವಾಗಿದೆ.ಬಹುಭುಜಾಕೃತಿಯ ಬೆಳಕಿನ ಸ್ಕ್ಯಾಟರಿಂಗ್ (SEC-MALS) ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಗಾತ್ರದ ಹೊರಗಿಡುವ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು 26.2 ± 0.5 kDa (Fig. S1c) ನ ಲೆಕ್ಕಾಚಾರದ ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕದೊಂದಿಗೆ ಒಂದು ಶಿಖರವನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿತು.ಇದು SPACA6 ಮೊನೊಮೆರಿಕ್ ಎಕ್ಟೊಡೊಮೈನ್‌ನ ಗಾತ್ರಕ್ಕೆ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗುತ್ತದೆ, ಶುದ್ಧೀಕರಣದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಆಲಿಗೊಮೆರೈಸೇಶನ್ ಸಂಭವಿಸಿಲ್ಲ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ವೃತ್ತಾಕಾರದ ಡೈಕ್ರೊಯಿಸಂ (CD) ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯು 51.3 °C (Fig. S1d,e) ಕರಗುವ ಬಿಂದುದೊಂದಿಗೆ ಮಿಶ್ರ α/β ರಚನೆಯನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿತು.ಸಿಡಿ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರಾದ ಡಿಕಾನ್ವಲ್ಯೂಷನ್ 38.6% α-ಹೆಲಿಕಲ್ ಮತ್ತು 15.8% β-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಅಂಶಗಳನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿತು (ಚಿತ್ರ S1d).
SPACA6 ಎಕ್ಟೋಡೋಮೈನ್ ಅನ್ನು ಯಾದೃಚ್ಛಿಕ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಕ್ಸ್ ಸೀಡಿಂಗ್ 38 ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸ್ಫಟಿಕೀಕರಿಸಲಾಯಿತು, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ 2.2 Å (ಕೋಷ್ಟಕ 1 ಮತ್ತು ಚಿತ್ರ S3) ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಹೊಂದಿರುವ ಡೇಟಾ ಸೆಟ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ರಚನೆಯ ನಿರ್ಣಯಕ್ಕಾಗಿ ಬ್ರೋಮೈಡ್ ಮಾನ್ಯತೆಯೊಂದಿಗೆ ತುಣುಕು-ಆಧಾರಿತ ಆಣ್ವಿಕ ಪರ್ಯಾಯ ಮತ್ತು SAD ಹಂತದ ಡೇಟಾದ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು (ಕೋಷ್ಟಕ 1 ಮತ್ತು ಚಿತ್ರ S4), ಅಂತಿಮ ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಮಾದರಿಯು 27-246 ಶೇಷಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ.ರಚನೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಿದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಯಾವುದೇ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಅಥವಾ ಆಲ್ಫಾಫೋಲ್ಡ್ ರಚನೆಗಳು ಲಭ್ಯವಿರಲಿಲ್ಲ.SPACA6 ಎಕ್ಟೋಡೋಮೈನ್ 20 Å × 20 Å × 85 Å ಅನ್ನು ಅಳೆಯುತ್ತದೆ, ಇದು ಏಳು ಹೆಲಿಕ್ಸ್ ಮತ್ತು ಒಂಬತ್ತು β-ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್‌ಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆರು ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಾಂಡ್‌ಗಳಿಂದ ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸಿದ ಉದ್ದವಾದ ತೃತೀಯ ಪದರವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ (Fig. 1a, b).Asn243 ಅಡ್ಡ ಸರಪಳಿಯ ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ ದುರ್ಬಲ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಈ ಶೇಷವು N- ಲಿಂಕ್ಡ್ ಗ್ಲೈಕೋಸೈಲೇಷನ್ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.ರಚನೆಯು ಎರಡು ಡೊಮೇನ್‌ಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ: N-ಟರ್ಮಿನಲ್ ನಾಲ್ಕು-ಹೆಲಿಕ್ಸ್ ಬಂಡಲ್ (4HB) ಮತ್ತು C-ಟರ್ಮಿನಲ್ Ig-ತರಹದ ಡೊಮೇನ್ ಅವುಗಳ ನಡುವೆ ಮಧ್ಯಂತರ ಹಿಂಜ್ ಪ್ರದೇಶದೊಂದಿಗೆ (Fig. 1c).
SPACA6 ನ ಬಾಹ್ಯಕೋಶೀಯ ಡೊಮೇನ್‌ನ ರಚನೆ.SPACA6 ನ ಬಾಹ್ಯಕೋಶೀಯ ಡೊಮೇನ್‌ನ ಪಟ್ಟಿಯ ರೇಖಾಚಿತ್ರ, N ನಿಂದ C-ಟರ್ಮಿನಸ್‌ಗೆ ಕಡು ನೀಲಿ ಬಣ್ಣದಿಂದ ಗಾಢ ಕೆಂಪು ಬಣ್ಣಕ್ಕೆ ಸರಪಳಿಯ ಬಣ್ಣ.ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧಗಳಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಸಿಸ್ಟೈನ್‌ಗಳನ್ನು ಮೆಜೆಂಟಾದಲ್ಲಿ ಹೈಲೈಟ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.b SPACA6 ನ ಬಾಹ್ಯಕೋಶೀಯ ಡೊಮೇನ್‌ನ ಸ್ಥಳಶಾಸ್ತ್ರ.ಚಿತ್ರ 1a ನಲ್ಲಿರುವಂತೆ ಅದೇ ಬಣ್ಣದ ಯೋಜನೆ ಬಳಸಿ.c SPACA6 ಬಾಹ್ಯಕೋಶೀಯ ಡೊಮೇನ್.4HB, ಹಿಂಜ್ ಮತ್ತು Ig ತರಹದ ಡೊಮೇನ್ ಸ್ಟ್ರಿಪ್ ಚಾರ್ಟ್‌ಗಳು ಕ್ರಮವಾಗಿ ಕಿತ್ತಳೆ, ಹಸಿರು ಮತ್ತು ನೀಲಿ ಬಣ್ಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ.ಪದರಗಳನ್ನು ಅಳತೆಗೆ ಎಳೆಯಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ.
SPACA6 ನ 4HB ಡೊಮೇನ್ ನಾಲ್ಕು ಮುಖ್ಯ ಹೆಲಿಕ್ಸ್ (ಹೆಲಿಕ್ಸ್ 1-4) ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ, ಇವುಗಳನ್ನು ಹೆಲಿಕಲ್ ಹೆಲಿಕ್ಸ್ (Fig. 2a) ರೂಪದಲ್ಲಿ ಜೋಡಿಸಲಾಗಿದೆ, ಆಂಟಿಪ್ಯಾರಲಲ್ ಮತ್ತು ಸಮಾನಾಂತರ ಸಂವಹನಗಳ ನಡುವೆ ಪರ್ಯಾಯವಾಗಿ (Fig. 2b).ಒಂದು ಸಣ್ಣ ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಸಿಂಗಲ್-ಟರ್ನ್ ಹೆಲಿಕ್ಸ್ (ಹೆಲಿಕ್ಸ್ 1′) ಅನ್ನು ಬಂಡಲ್‌ಗೆ ಲಂಬವಾಗಿ ಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಹೆಲಿಕ್ಸ್ 1 ಮತ್ತು 2 ನೊಂದಿಗೆ ತ್ರಿಕೋನವನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ತ್ರಿಕೋನವು ಹೆಲಿಕ್ಸ್ 3 ಮತ್ತು 4 ರ ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ದಟ್ಟವಾದ ಪ್ಯಾಕಿಂಗ್‌ನ ಹೆಲಿಕಲ್-ಟ್ವಿಸ್ಟೆಡ್ ಪ್ಯಾಕಿಂಗ್‌ನಲ್ಲಿ ಸ್ವಲ್ಪ ವಿರೂಪಗೊಂಡಿದೆ. ಚಿತ್ರ 2a).
4HB N-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಸ್ಟ್ರಿಪ್ ಚಾರ್ಟ್.b ನಾಲ್ಕು ಹೆಲಿಸ್‌ಗಳ ಬಂಡಲ್‌ನ ಮೇಲಿನ ನೋಟ, ಪ್ರತಿ ಹೆಲಿಕ್ಸ್ ಅನ್ನು N-ಟರ್ಮಿನಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಗಾಢ ನೀಲಿ ಮತ್ತು C-ಟರ್ಮಿನಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಗಾಢ ಕೆಂಪು ಬಣ್ಣದಲ್ಲಿ ಹೈಲೈಟ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.c 4HB ಗಾಗಿ ಟಾಪ್-ಡೌನ್ ಸ್ಪೈರಲ್ ವೀಲ್ ರೇಖಾಚಿತ್ರ, ಪ್ರತಿ ಶೇಷವನ್ನು ಏಕ-ಅಕ್ಷರದ ಅಮಿನೊ ಆಸಿಡ್ ಕೋಡ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ವೃತ್ತದಂತೆ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ;ಚಕ್ರದ ಮೇಲ್ಭಾಗದಲ್ಲಿರುವ ನಾಲ್ಕು ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳನ್ನು ಮಾತ್ರ ಎಣಿಸಲಾಗಿದೆ.ಧ್ರುವೀಯವಲ್ಲದ ಅವಶೇಷಗಳು ಹಳದಿ ಬಣ್ಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ, ಧ್ರುವೀಯ ಚಾರ್ಜ್ ಮಾಡದ ಅವಶೇಷಗಳು ಹಸಿರು ಬಣ್ಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ, ಧನಾತ್ಮಕ ಆವೇಶದ ಉಳಿಕೆಗಳು ನೀಲಿ ಬಣ್ಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಋಣಾತ್ಮಕ ಆವೇಶದ ಉಳಿಕೆಗಳು ಕೆಂಪು ಬಣ್ಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ.d 4HB ಡೊಮೇನ್‌ನ ತ್ರಿಕೋನ ಮುಖಗಳು, ಕಿತ್ತಳೆ ಬಣ್ಣದಲ್ಲಿ 4HBಗಳು ಮತ್ತು ಹಸಿರು ಬಣ್ಣದಲ್ಲಿ ಕೀಲುಗಳು.ಎರಡೂ ಒಳಸೇರಿಸುವಿಕೆಗಳು ರಾಡ್-ಆಕಾರದ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧಗಳನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ.
4HB ಮುಖ್ಯವಾಗಿ ಅಲಿಫ್ಯಾಟಿಕ್ ಮತ್ತು ಆರೊಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಅವಶೇಷಗಳಿಂದ ಕೂಡಿದ ಆಂತರಿಕ ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಕೋರ್ ಮೇಲೆ ಕೇಂದ್ರೀಕೃತವಾಗಿದೆ (Fig. 2c).ಕೋರ್ Cys41 ಮತ್ತು Cys55 ನಡುವಿನ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ ಅದು ಹೆಲಿಕ್ಸ್ 1 ಮತ್ತು 2 ಅನ್ನು ಮೇಲಿನ ಎತ್ತರದ ತ್ರಿಕೋನದಲ್ಲಿ ಜೋಡಿಸುತ್ತದೆ (Fig. 2d).ಹೆಲಿಕ್ಸ್ 1′ ನಲ್ಲಿನ CXXC ಮೋಟಿಫ್ ಮತ್ತು ಹಿಂಜ್ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿ β-ಹೇರ್‌ಪಿನ್‌ನ ತುದಿಯಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವ ಮತ್ತೊಂದು CXXC ಮೋಟಿಫ್ ನಡುವೆ ಎರಡು ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧಗಳನ್ನು ರಚಿಸಲಾಗಿದೆ (Fig. 2d).ಅಜ್ಞಾತ ಕ್ರಿಯೆಯೊಂದಿಗೆ (Arg37) ಒಂದು ಸಂಪ್ರದಾಯವಾದಿ ಅರ್ಜಿನೈನ್ ಶೇಷವು 1′, 1, ಮತ್ತು 2 ಹೆಲಿಸ್‌ಗಳಿಂದ ರೂಪುಗೊಂಡ ಟೊಳ್ಳಾದ ತ್ರಿಕೋನದೊಳಗೆ ಇದೆ. ಅಲಿಫಾಟಿಕ್ ಇಂಗಾಲದ ಪರಮಾಣುಗಳು Cβ, Cγ ಮತ್ತು Cδ Arg37 ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಕೋರ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಂವಹನ ನಡೆಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅದರ ಗ್ವಾನಿಡೈನ್ ಗುಂಪುಗಳನ್ನು ಆವರ್ತಕವಾಗಿ ಚಲಿಸುತ್ತದೆ. Thr32 ಬೆನ್ನೆಲುಬು ಮತ್ತು ಸೈಡ್ ಚೈನ್ (Fig. S5a,b) ನಡುವಿನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯ ಮೂಲಕ ಹೆಲಿಕ್ಸ್ 1′ ಮತ್ತು 1 ನಡುವೆ.Tyr34 ಎರಡು ಸಣ್ಣ ಕುಳಿಗಳನ್ನು ಬಿಟ್ಟು ಕುಹರದೊಳಗೆ ವಿಸ್ತರಿಸುತ್ತದೆ, ಅದರ ಮೂಲಕ Arg37 ದ್ರಾವಕದೊಂದಿಗೆ ಸಂವಹನ ನಡೆಸಬಹುದು.
Ig-ತರಹದ β-ಸ್ಯಾಂಡ್‌ವಿಚ್ ಡೊಮೇನ್‌ಗಳು ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಕೋರ್ 39 ಮೂಲಕ ಸಂವಹನ ನಡೆಸುವ ಎರಡು ಅಥವಾ ಹೆಚ್ಚಿನ ಬಹು-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಆಂಫಿಪಾಥಿಕ್ β-ಶೀಟ್‌ಗಳ ಸಾಮಾನ್ಯ ವೈಶಿಷ್ಟ್ಯವನ್ನು ಹಂಚಿಕೊಳ್ಳುವ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ದೊಡ್ಡ ಸೂಪರ್‌ಫ್ಯಾಮಿಲಿಯಾಗಿದೆ. SPACA6 ನ C-ಟರ್ಮಿನಲ್ Ig-ತರಹದ ಡೊಮೇನ್ ಅದೇ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಮತ್ತು ಎರಡು ಪದರಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ (Fig. S6a).ಶೀಟ್ 1 ಎಂಬುದು ನಾಲ್ಕು ಎಳೆಗಳ (D, F, H, ಮತ್ತು I ಎಳೆಗಳು) β-ಶೀಟ್ ಆಗಿದ್ದು, ಅಲ್ಲಿ F, H ಮತ್ತು I ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್‌ಗಳು ಸಮಾನಾಂತರ-ವಿರೋಧಿ ಜೋಡಣೆಯನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು I ಮತ್ತು D ಎಳೆಗಳು ಸಮಾನಾಂತರ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ.ಕೋಷ್ಟಕ 2 ಒಂದು ಸಣ್ಣ ವಿರೋಧಿ ಸಮಾನಾಂತರ ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಬೀಟಾ ಶೀಟ್ ಆಗಿದೆ (ಸ್ಟ್ರ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳು E ಮತ್ತು G).E ಸರಪಳಿಯ C-ಟರ್ಮಿನಸ್ ಮತ್ತು H ಸರಪಳಿಯ ಕೇಂದ್ರ (Cys170-Cys226) (Fig. S6b) ನಡುವೆ ಆಂತರಿಕ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧವನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ.ಈ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧವು ಇಮ್ಯುನೊಗ್ಲಾಬ್ಯುಲಿನ್ 40,41 ನ β- ಸ್ಯಾಂಡ್‌ವಿಚ್ ಡೊಮೇನ್‌ನಲ್ಲಿರುವ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧಕ್ಕೆ ಹೋಲುತ್ತದೆ.
ನಾಲ್ಕು-ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ β-ಶೀಟ್ ಅದರ ಸಂಪೂರ್ಣ ಉದ್ದಕ್ಕೂ ತಿರುಗುತ್ತದೆ, ಆಕಾರ ಮತ್ತು ಸ್ಥಾಯೀವಿದ್ಯುತ್ತಿನ ಭಿನ್ನವಾಗಿರುವ ಅಸಮವಾದ ಅಂಚುಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ.ತೆಳುವಾದ ಅಂಚು ಒಂದು ಫ್ಲಾಟ್ ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಪರಿಸರ ಮೇಲ್ಮೈಯಾಗಿದ್ದು, SPACA6 (Fig. S6b,c) ನಲ್ಲಿ ಉಳಿದಿರುವ ಅಸಮ ಮತ್ತು ಸ್ಥಾಯೀವಿದ್ಯುತ್ತಿನ ವೈವಿಧ್ಯಮಯ ಮೇಲ್ಮೈಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಎದ್ದು ಕಾಣುತ್ತದೆ.ತೆರೆದ ಬೆನ್ನೆಲುಬು ಕಾರ್ಬೊನಿಲ್/ಅಮಿನೋ ಗುಂಪುಗಳು ಮತ್ತು ಧ್ರುವೀಯ ಅಡ್ಡ ಸರಪಳಿಗಳ ಪ್ರಭಾವಲಯವು ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಮೇಲ್ಮೈಯನ್ನು ಸುತ್ತುವರೆದಿದೆ (Fig. S6c).ವಿಶಾಲವಾದ ಅಂಚು ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಕೋರ್‌ನ N-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಭಾಗವನ್ನು ನಿರ್ಬಂಧಿಸುವ ಮತ್ತು F ಸರಪಳಿಯ ಬೆನ್ನೆಲುಬಿನ (Fig. S6d) ತೆರೆದ ಧ್ರುವ ಗುಂಪಿನೊಂದಿಗೆ ಮೂರು ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಬಂಧಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸುವ ಕ್ಯಾಪ್ಡ್ ಹೆಲಿಕಲ್ ವಿಭಾಗದಿಂದ ಮುಚ್ಚಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ.ಈ ಅಂಚಿನ C-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಭಾಗವು ಭಾಗಶಃ ತೆರೆದಿರುವ ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಕೋರ್ನೊಂದಿಗೆ ದೊಡ್ಡ ಪಾಕೆಟ್ ಅನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ.ಮೂರು ಸೆಟ್‌ಗಳ ಡಬಲ್ ಅರ್ಜಿನೈನ್ ಅವಶೇಷಗಳು (Arg162-Arg221, Arg201-Arg205 ಮತ್ತು Arg212-Arg214) ಮತ್ತು ಕೇಂದ್ರೀಯ ಹಿಸ್ಟೈಡಿನ್ (His220) (ಚಿತ್ರ S6e) ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿ ಪಾಕೆಟ್ ಧನಾತ್ಮಕ ಶುಲ್ಕಗಳಿಂದ ಆವೃತವಾಗಿದೆ.
ಹಿಂಜ್ ಪ್ರದೇಶವು ಹೆಲಿಕಲ್ ಡೊಮೇನ್ ಮತ್ತು Ig-ತರಹದ ಡೊಮೇನ್ ನಡುವಿನ ಒಂದು ಸಣ್ಣ ವಿಭಾಗವಾಗಿದೆ, ಇದು ಒಂದು ಆಂಟಿಪ್ಯಾರಲಲ್ ಮೂರು-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ β-ಪದರ (ಎ, ಬಿ ಮತ್ತು ಸಿ ಎಳೆಗಳು), ಸಣ್ಣ 310 ಹೆಲಿಕ್ಸ್ ಮತ್ತು ಹಲವಾರು ದೀರ್ಘ ಯಾದೃಚ್ಛಿಕ ಹೆಲಿಕಲ್ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ.(ಚಿತ್ರ S7).ಹಿಂಜ್ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿ ಕೋವೆಲೆಂಟ್ ಮತ್ತು ಸ್ಥಾಯೀವಿದ್ಯುತ್ತಿನ ಸಂಪರ್ಕಗಳ ಜಾಲವು 4HB ಮತ್ತು Ig-ರೀತಿಯ ಡೊಮೇನ್ ನಡುವಿನ ದೃಷ್ಟಿಕೋನವನ್ನು ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ.ನೆಟ್ವರ್ಕ್ ಅನ್ನು ಮೂರು ಭಾಗಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಬಹುದು.ಮೊದಲ ಭಾಗವು ಎರಡು CXXC ಮೋಟಿಫ್‌ಗಳನ್ನು (27CXXC30 ಮತ್ತು 139CXXC142) ಒಳಗೊಂಡಿದೆ, ಇದು ಹಿಂಜ್‌ನಲ್ಲಿನ β-ಹೇರ್‌ಪಿನ್ ಮತ್ತು 4HB ಯಲ್ಲಿನ 1′ ಹೆಲಿಕ್ಸ್ ನಡುವೆ ಒಂದು ಜೋಡಿ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ.ಎರಡನೇ ಭಾಗವು Ig ತರಹದ ಡೊಮೇನ್ ಮತ್ತು ಹಿಂಜ್ ನಡುವಿನ ಸ್ಥಾಯೀವಿದ್ಯುತ್ತಿನ ಸಂವಹನಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ.ಹಿಂಜ್‌ನಲ್ಲಿನ Glu132 Ig ತರಹದ ಡೊಮೇನ್‌ನಲ್ಲಿ Arg233 ಮತ್ತು ಹಿಂಜ್‌ನಲ್ಲಿ Arg135 ನೊಂದಿಗೆ ಉಪ್ಪು ಸೇತುವೆಯನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ.ಮೂರನೇ ಭಾಗವು Ig ತರಹದ ಡೊಮೇನ್ ಮತ್ತು ಹಿಂಜ್ ಪ್ರದೇಶದ ನಡುವಿನ ಕೋವೆಲನ್ಸಿಯ ಬಂಧವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ.ಎರಡು ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಾಂಡ್‌ಗಳು (Cys124-Cys147 ಮತ್ತು Cys128-Cys153) ಹಿಂಜ್ ಲೂಪ್ ಅನ್ನು ಲಿಂಕರ್‌ಗೆ ಸಂಪರ್ಕಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು Gln131 ಮತ್ತು ಬೆನ್ನೆಲುಬು ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಗುಂಪಿನ ನಡುವಿನ ಸ್ಥಾಯೀವಿದ್ಯುತ್ತಿನ ಸಂವಹನಗಳಿಂದ ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಇದು ಮೊದಲ Ig-ರೀತಿಯ ಡೊಮೇನ್‌ಗೆ ಪ್ರವೇಶವನ್ನು ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆ.ಸರಪಳಿ.
SPACA6 ಎಕ್ಟೋಡೋಮೈನ್‌ನ ರಚನೆ ಮತ್ತು 4HB ಮತ್ತು Ig-ತರಹದ ಡೊಮೇನ್‌ಗಳ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ರಚನೆಗಳನ್ನು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಡೇಟಾಬೇಸ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ರಚನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಒಂದೇ ರೀತಿಯ ದಾಖಲೆಗಳನ್ನು ಹುಡುಕಲು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ 42 .ನಾವು ಹೆಚ್ಚಿನ ಡಾಲಿ Z ಸ್ಕೋರ್‌ಗಳು, ಸಣ್ಣ ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನಗಳು ಮತ್ತು ದೊಡ್ಡ LALI ಸ್ಕೋರ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೊಂದಾಣಿಕೆಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಿದ್ದೇವೆ (ಎರಡನೆಯದು ರಚನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಸಮಾನವಾದ ಅವಶೇಷಗಳ ಸಂಖ್ಯೆ).ಪೂರ್ಣ ಎಕ್ಟೋಡೊಮೈನ್ ಹುಡುಕಾಟದಿಂದ (ಟೇಬಲ್ S1) ಮೊದಲ 10 ಹಿಟ್‌ಗಳು ಸ್ವೀಕಾರಾರ್ಹ Z- ಸ್ಕೋರ್ >842 ಅನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದರೂ, 4HB ಅಥವಾ Ig-ತರಹದ ಡೊಮೇನ್‌ನ ಹುಡುಕಾಟವು ಈ ಹಿಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನವು β- ಸ್ಯಾಂಡ್‌ವಿಚ್‌ಗಳಿಗೆ ಮಾತ್ರ ಸಂವಾದಿಯಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ.ಅನೇಕ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವ ಸರ್ವತ್ರ ಮಡಿಕೆ.ಡಾಲಿಯಲ್ಲಿನ ಎಲ್ಲಾ ಮೂರು ಹುಡುಕಾಟಗಳು ಕೇವಲ ಒಂದು ಫಲಿತಾಂಶವನ್ನು ನೀಡಿವೆ: IZUMO1.
SPACA6 ಮತ್ತು IZUMO1 ರಚನಾತ್ಮಕ ಹೋಲಿಕೆಗಳನ್ನು 7,32,37 ಹಂಚಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ ಎಂದು ದೀರ್ಘಕಾಲ ಸೂಚಿಸಲಾಗಿದೆ.ಈ ಎರಡು ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಸಮ್ಮಿಳನ-ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳ ಎಕ್ಟೋಡೊಮೈನ್‌ಗಳು ಕೇವಲ 21% ಅನುಕ್ರಮ ಗುರುತನ್ನು ಹಂಚಿಕೊಂಡಿದ್ದರೂ (ಚಿತ್ರ S8a), ಸಂರಕ್ಷಿತ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಾಂಡ್ ಪ್ಯಾಟರ್ನ್ ಮತ್ತು SPACA6 ನಲ್ಲಿ ಊಹಿಸಲಾದ C-ಟರ್ಮಿನಲ್ Ig-ರೀತಿಯ ಡೊಮೇನ್ ಸೇರಿದಂತೆ ಸಂಕೀರ್ಣ ಪುರಾವೆಗಳನ್ನು ನಿರ್ಮಿಸಲು ಆರಂಭಿಕ ಪ್ರಯತ್ನಗಳನ್ನು ಅನುಮತಿಸಲಾಗಿದೆ. IZUMO1 ಅನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನಂತೆ ಬಳಸಿಕೊಂಡು A SPACA6 ಮೌಸ್‌ನ ಹೋಮೋಲಜಿ ಮಾದರಿ37.ನಮ್ಮ ರಚನೆಯು ಈ ಮುನ್ಸೂಚನೆಗಳನ್ನು ದೃಢೀಕರಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಹೋಲಿಕೆಯ ನಿಜವಾದ ಮಟ್ಟವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.ವಾಸ್ತವವಾಗಿ, SPACA6 ಮತ್ತು IZUMO137,43,44 ರಚನೆಗಳು ಒಂದೇ ರೀತಿಯ 4HB ಮತ್ತು Ig-ರೀತಿಯ β-ಸ್ಯಾಂಡ್‌ವಿಚ್ ಡೊಮೇನ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಒಂದೇ ಎರಡು-ಡೊಮೇನ್ ಆರ್ಕಿಟೆಕ್ಚರ್ (Fig. S8b) ಅನ್ನು ಹಿಂಜ್ ಪ್ರದೇಶದಿಂದ ಸಂಪರ್ಕಿಸುತ್ತವೆ (Fig. S8c).
IZUMO1 ಮತ್ತು SPACA6 4HB ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಸ್ಪೈರಲ್ ಬಂಡಲ್‌ಗಳಿಂದ ಸಾಮಾನ್ಯ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ.ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ 4HBಗಳು, ಎಂಡೋಸೋಮಲ್ ಸಮ್ಮಿಳನ 45,46 ರಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ SNARE ಪ್ರೊಟೀನ್ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವಂತೆ, ಕೇಂದ್ರ ಅಕ್ಷ 47 ರ ಸುತ್ತ ಸ್ಥಿರವಾದ ವಕ್ರತೆಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವ ಸಮಾನ ಅಂತರದ ಹೆಲಿಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ. ಇದಕ್ಕೆ ವಿರುದ್ಧವಾಗಿ, IZUMO1 ಮತ್ತು SPACA6 ಎರಡರಲ್ಲೂ ಹೆಲಿಕಲ್ ಡೊಮೇನ್‌ಗಳು ವೇರಿಯಬಲ್ ವಕ್ರತೆಯೊಂದಿಗೆ ವಿರೂಪಗೊಂಡಿವೆ ಮತ್ತು ಅಸಮ ಪ್ಯಾಕಿಂಗ್ (ಚಿತ್ರ S8d).ಟ್ವಿಸ್ಟ್, ಬಹುಶಃ 1′, 1 ಮತ್ತು 2 ಹೆಲಿಸ್‌ಗಳಿಂದ ರೂಪುಗೊಂಡ ತ್ರಿಕೋನದಿಂದ ಉಂಟಾಗುತ್ತದೆ, ಇದನ್ನು IZUMO1 ಮತ್ತು SPACA6 ನಲ್ಲಿ ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಹೆಲಿಕ್ಸ್ 1′ ನಲ್ಲಿ ಅದೇ CXXC ಮೋಟಿಫ್‌ನಿಂದ ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, SPACA6 ನಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವ ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧವು (Cys41 ಮತ್ತು Cys55 ಕೋವೆಲೆಂಟ್ 1 ಮತ್ತು 2 ಮೇಲೆ ಹೆಲಿಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ಸಂಪರ್ಕಿಸುತ್ತದೆ) ತ್ರಿಕೋನದ ತುದಿಯಲ್ಲಿ ತೀಕ್ಷ್ಣವಾದ ತುದಿಯನ್ನು ಸೃಷ್ಟಿಸುತ್ತದೆ, SPACA6 ಅನ್ನು IZUMO1 ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ತಿರುಚಿದಂತಾಗುತ್ತದೆ, ಹೆಚ್ಚು ಸ್ಪಷ್ಟವಾದ ಕುಳಿ ತ್ರಿಕೋನಗಳೊಂದಿಗೆ.ಜೊತೆಗೆ, IZUMO1 SPACA6 ನಲ್ಲಿ ಈ ಕುಹರದ ಮಧ್ಯದಲ್ಲಿ ಗಮನಿಸಿದ Arg37 ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದಿಲ್ಲ.ಇದಕ್ಕೆ ವಿರುದ್ಧವಾಗಿ, IZUMO1 ಅಲಿಫಾಟಿಕ್ ಮತ್ತು ಆರೊಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಅವಶೇಷಗಳ ಹೆಚ್ಚು ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಕೋರ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.
IZUMO1 ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಮತ್ತು ಫೈವ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ β-ಶೀಟ್43 ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ Ig-ರೀತಿಯ ಡೊಮೇನ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.IZUMO1 ನಲ್ಲಿನ ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ SPACA6 ನಲ್ಲಿನ ಸುರುಳಿಯನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್‌ನಲ್ಲಿ ಬೆನ್ನುಮೂಳೆಯ ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಬಂಧಗಳನ್ನು ಮಿತಿಗೊಳಿಸಲು F ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಂವಹಿಸುತ್ತದೆ.ಹೋಲಿಕೆಯ ಒಂದು ಕುತೂಹಲಕಾರಿ ಅಂಶವೆಂದರೆ ಎರಡು ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳ Ig ತರಹದ ಡೊಮೇನ್‌ಗಳ ಊಹಿಸಲಾದ ಮೇಲ್ಮೈ ಚಾರ್ಜ್.IZUMO1 ಮೇಲ್ಮೈ SPACA6 ಮೇಲ್ಮೈಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಋಣಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಚಾರ್ಜ್ ಆಗಿದೆ.ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಶುಲ್ಕವು ವೀರ್ಯ ಪೊರೆಯನ್ನು ಎದುರಿಸುತ್ತಿರುವ ಸಿ-ಟರ್ಮಿನಸ್ ಬಳಿ ಇದೆ.SPACA6 ನಲ್ಲಿ, ಅದೇ ಪ್ರದೇಶಗಳು ಹೆಚ್ಚು ತಟಸ್ಥ ಅಥವಾ ಧನಾತ್ಮಕ ಚಾರ್ಜ್ ಆಗಿದ್ದವು (Fig. S8e).ಉದಾಹರಣೆಗೆ, SPACA6 ನಲ್ಲಿ ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಮೇಲ್ಮೈ (ತೆಳುವಾದ ಅಂಚುಗಳು) ಮತ್ತು ಧನಾತ್ಮಕ ಆವೇಶದ ಹೊಂಡಗಳು (ವಿಶಾಲ ಅಂಚುಗಳು) IZUMO1 ನಲ್ಲಿ ಋಣಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಚಾರ್ಜ್ ಆಗುತ್ತವೆ.
IZUMO1 ಮತ್ತು SPACA6 ನಡುವಿನ ಸಂಬಂಧ ಮತ್ತು ದ್ವಿತೀಯಕ ರಚನೆಯ ಅಂಶಗಳು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಸಂರಕ್ಷಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿದ್ದರೂ, Ig-ತರಹದ ಡೊಮೇನ್‌ಗಳ ರಚನಾತ್ಮಕ ಜೋಡಣೆಯು ಎರಡು ಡೊಮೇನ್‌ಗಳು ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧಿಸಿ ಅವುಗಳ ಸಾಮಾನ್ಯ ದೃಷ್ಟಿಕೋನದಲ್ಲಿ ಭಿನ್ನವಾಗಿರುತ್ತವೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ (Fig. S9).IZUMO1 ನ ಸುರುಳಿಯಾಕಾರದ ಬಂಡಲ್ β-ಸ್ಯಾಂಡ್‌ವಿಚ್‌ನ ಸುತ್ತ ವಕ್ರವಾಗಿದೆ, ಕೇಂದ್ರ ಅಕ್ಷದಿಂದ ಸುಮಾರು 50 ° ನಲ್ಲಿ ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದ "ಬೂಮರಾಂಗ್" ಆಕಾರವನ್ನು ರಚಿಸುತ್ತದೆ.ಇದಕ್ಕೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿ, SPACA6 ನಲ್ಲಿನ ಸುರುಳಿಯ ಕಿರಣವು ವಿರುದ್ಧ ದಿಕ್ಕಿನಲ್ಲಿ ಸುಮಾರು 10 ° ವಾಲಿದೆ.ಈ ದೃಷ್ಟಿಕೋನಗಳಲ್ಲಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳು ಹಿಂಜ್ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳ ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿರಬಹುದು.ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಅನುಕ್ರಮ ಮಟ್ಟದಲ್ಲಿ, IZUMO1 ಮತ್ತು SPACA6 ಸಿಸ್ಟೀನ್, ಗ್ಲೈಸಿನ್ ಮತ್ತು ಆಸ್ಪರ್ಟಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಅವಶೇಷಗಳನ್ನು ಹೊರತುಪಡಿಸಿ, ಹಿಂಜ್‌ನಲ್ಲಿ ಕಡಿಮೆ ಅನುಕ್ರಮ ಹೋಲಿಕೆಯನ್ನು ಹಂಚಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ.ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ, ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಬಂಧಗಳು ಮತ್ತು ಸ್ಥಾಯೀವಿದ್ಯುತ್ತಿನ ಜಾಲಗಳು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿವೆ.β-ಶೀಟ್ ದ್ವಿತೀಯ ರಚನೆಯ ಅಂಶಗಳನ್ನು IZUMO1 ಮತ್ತು SPACA6 ಹಂಚಿಕೊಂಡಿದೆ, ಆದಾಗ್ಯೂ IZUMO1 ನಲ್ಲಿನ ಸರಪಳಿಗಳು ಹೆಚ್ಚು ಉದ್ದವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು 310 ಹೆಲಿಕ್ಸ್ (ಹೆಲಿಕ್ಸ್ 5) SPACA6 ಗೆ ವಿಶಿಷ್ಟವಾಗಿದೆ.ಈ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳು ಎರಡು ಒಂದೇ ರೀತಿಯ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳಿಗೆ ವಿಭಿನ್ನ ಡೊಮೇನ್ ದೃಷ್ಟಿಕೋನಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತವೆ.
ನಮ್ಮ ಡಾಲಿ ಸರ್ವರ್ ಹುಡುಕಾಟವು SPACA6 ಮತ್ತು IZUMO1 ಈ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ 4HB ಪಟ್ಟು (ಟೇಬಲ್ S1) ಹೊಂದಿರುವ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಡೇಟಾಬೇಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹವಾಗಿರುವ ಎರಡು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕವಾಗಿ ನಿರ್ಧರಿಸಿದ ರಚನೆಗಳಾಗಿವೆ ಎಂದು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿದೆ.ತೀರಾ ಇತ್ತೀಚೆಗೆ, ಡೀಪ್‌ಮೈಂಡ್ (ಆಲ್ಫಾಬೆಟ್/ಗೂಗಲ್) ಆಲ್ಫಾಫೋಲ್ಡ್ ಅನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದೆ, ಇದು ನ್ಯೂರಲ್ ನೆಟ್‌ವರ್ಕ್ ಆಧಾರಿತ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಾಗಿದ್ದು ಅದು ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಅನುಕ್ರಮಗಳಿಂದ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ 3D ರಚನೆಗಳನ್ನು ನಿಖರವಾಗಿ ಊಹಿಸಬಹುದು.ನಾವು SPACA6 ರಚನೆಯನ್ನು ಪರಿಹರಿಸಿದ ಸ್ವಲ್ಪ ಸಮಯದ ನಂತರ, ಆಲ್ಫಾಫೋಲ್ಡ್ ಡೇಟಾಬೇಸ್ ಬಿಡುಗಡೆಯಾಯಿತು, ಇದು ಮಾನವ ಪ್ರೋಟಿಯೋಮ್ 48,49 ನಲ್ಲಿರುವ ಎಲ್ಲಾ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ 98.5% ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಭವಿಷ್ಯ ರಚನೆಯ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ.ನಮ್ಮ ಪರಿಹರಿಸಿದ SPACA6 ರಚನೆಯನ್ನು ಹುಡುಕಾಟ ಮಾದರಿಯಾಗಿ ಬಳಸಿಕೊಂಡು, ಆಲ್ಫಾಫೋಲ್ಡ್ ಹ್ಯೂಮನ್ ಪ್ರೋಟಿಯೋಮ್‌ನಲ್ಲಿನ ಮಾದರಿಗಾಗಿ ರಚನಾತ್ಮಕ ಹೋಮಾಲಜಿ ಹುಡುಕಾಟವು SPACA6 ಮತ್ತು IZUMO1 ಗೆ ಸಂಭವನೀಯ ರಚನಾತ್ಮಕ ಹೋಲಿಕೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಅಭ್ಯರ್ಥಿಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಿದೆ.SPACA6 (Fig. S10a) ಅನ್ನು ಊಹಿಸುವಲ್ಲಿ AlphaFold ನ ನಂಬಲಾಗದ ನಿಖರತೆಯನ್ನು ನೀಡಲಾಗಿದೆ - ವಿಶೇಷವಾಗಿ 1.1 Å rms ectodomain ನಮ್ಮ ಪರಿಹರಿಸಿದ ರಚನೆಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ (Fig. S10b) - ಗುರುತಿಸಲಾದ SPACA6 ಹೊಂದಾಣಿಕೆಗಳು ನಿಖರವಾಗಿರಬಹುದು ಎಂದು ನಾವು ಭರವಸೆ ಹೊಂದಬಹುದು.
ಹಿಂದೆ, PSI-BLAST ಮೂರು ಇತರ ವೀರ್ಯ-ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ IZUMO1 ಕ್ಲಸ್ಟರ್‌ಗಾಗಿ ಹುಡುಕಿದೆ: IZUMO2, IZUMO3, ಮತ್ತು IZUMO450.ಈ IZUMO ಫ್ಯಾಮಿಲಿ ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳು IZUMO1 (ಚಿತ್ರಗಳು 3a ಮತ್ತು S11) ಯಂತೆಯೇ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಾಂಡ್ ಮಾದರಿಯೊಂದಿಗೆ 4HB ಡೊಮೇನ್‌ಗೆ ಮಡಚಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ ಎಂದು ಆಲ್ಫಾಫೋಲ್ಡ್ ಊಹಿಸಿದೆ, ಆದರೂ ಅವು Ig-ರೀತಿಯ ಡೊಮೇನ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದಿಲ್ಲ.IZUMO2 ಮತ್ತು IZUMO3 ಏಕಪಕ್ಷೀಯ ಪೊರೆಯ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು IZUMO1 ಅನ್ನು ಹೋಲುತ್ತವೆ ಎಂದು ಊಹಿಸಲಾಗಿದೆ, ಆದರೆ IZUMO4 ಸ್ರವಿಸುತ್ತದೆ.ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಸಮ್ಮಿಳನದಲ್ಲಿ IZUMO 2, 3 ಮತ್ತು 4 ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಕಾರ್ಯಗಳನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ.IZUMO3 ವೀರ್ಯಾಣು ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಅಕ್ರೋಸೋಮ್ ಬಯೋಜೆನೆಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತಿಳಿದುಬಂದಿದೆ51 ಮತ್ತು IZUMO ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂಕೀರ್ಣ50 ಅನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆಸಸ್ತನಿಗಳು, ಸರೀಸೃಪಗಳು ಮತ್ತು ಉಭಯಚರಗಳಲ್ಲಿನ IZUMO ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಸಂರಕ್ಷಣೆಯು ಅವುಗಳ ಸಂಭಾವ್ಯ ಕಾರ್ಯವು DCST1/2, SOF1 ಮತ್ತು FIMP ಯಂತಹ ಇತರ ತಿಳಿದಿರುವ ಗ್ಯಾಮೆಟ್-ಸಮ್ಮಿಳನ-ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಸ್ಥಿರವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
4HB, ಹಿಂಜ್ ಮತ್ತು Ig ತರಹದ ಡೊಮೇನ್‌ಗಳನ್ನು ಕ್ರಮವಾಗಿ ಕಿತ್ತಳೆ, ಹಸಿರು ಮತ್ತು ನೀಲಿ ಬಣ್ಣಗಳಲ್ಲಿ ಹೈಲೈಟ್ ಮಾಡಲಾದ IST ಸೂಪರ್‌ಫ್ಯಾಮಿಲಿಯ ಡೊಮೇನ್ ಆರ್ಕಿಟೆಕ್ಚರ್‌ನ ರೇಖಾಚಿತ್ರ.IZUMO4 ಒಂದು ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ C-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಪ್ರದೇಶವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಅದು ಕಪ್ಪು ಬಣ್ಣದಲ್ಲಿ ಕಾಣುತ್ತದೆ.ದೃಢೀಕರಿಸಿದ ಮತ್ತು ಹಾಕುವ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧಗಳನ್ನು ಕ್ರಮವಾಗಿ ಘನ ಮತ್ತು ಚುಕ್ಕೆಗಳ ರೇಖೆಗಳಿಂದ ತೋರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.b IZUMO1 (PDB: 5F4E), SPACA6, IZUMO2 (ಆಲ್ಫಾಫೋಲ್ಡ್ DB: AF-Q6UXV1-F1), IZUMO3 (ಆಲ್ಫಾಫೋಲ್ಡ್ DB: AF-Q5VZ72-F1), IZUMO4 (ಆಲ್ಫಾಫೋಲ್ಡ್ DB: AF-Q1ZYLF9), ಮತ್ತು DB: AF-Q1ZYL8-F1) : AF-Q1ZYL8-F1) : AF-Q3KNT9-F1) ಪ್ಯಾನೆಲ್ A. ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧಗಳನ್ನು ಮೆಜೆಂಟಾದಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವ ಅದೇ ಬಣ್ಣದ ಶ್ರೇಣಿಯಲ್ಲಿ ಪ್ರದರ್ಶಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.TMEM95, IZUMO2 ಮತ್ತು IZUMO3 ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಮೆಂಬ್ರೇನ್ ಹೆಲಿಸ್‌ಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ.
IZUMO ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಿಂತ ಭಿನ್ನವಾಗಿ, ಇತರ SPACA ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು (ಅಂದರೆ, SPACA1, SPACA3, SPACA4, SPACA5, ಮತ್ತು SPACA9) SPACA6 (Fig. S12) ಗಿಂತ ರಚನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಭಾವಿಸಲಾಗಿದೆ.SPACA9 ಮಾತ್ರ 4HB ಅನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಆದರೆ ಇದು SPACA6 ನಂತೆ ಅದೇ ಸಮಾನಾಂತರ-ವಿರೋಧಿ-ಸಮಾನಾಂತರ ದೃಷ್ಟಿಕೋನ ಅಥವಾ ಅದೇ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಿರೀಕ್ಷಿಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ.SPACA1 ಮಾತ್ರ ಒಂದೇ ರೀತಿಯ Ig ತರಹದ ಡೊಮೇನ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.SPACA3, SPACA4 ಮತ್ತು SPACA5 SPACA6 ಗಿಂತ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ವಿಭಿನ್ನವಾದ ರಚನೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ ಎಂದು ಆಲ್ಫಾಫೋಲ್ಡ್ ಊಹಿಸುತ್ತದೆ.ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, SPACA4 ಸಹ ಫಲೀಕರಣದಲ್ಲಿ ಒಂದು ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ, ಆದರೆ SPACA6 ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ, ಬದಲಿಗೆ ವೀರ್ಯ ಮತ್ತು ಓಸೈಟ್ ಝೋನಾ ಪೆಲ್ಲುಸಿಡಾ 52 ನಡುವಿನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಸುಲಭಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ.
ನಮ್ಮ AlphaFold ಹುಡುಕಾಟವು IZUMO1 ಮತ್ತು SPACA6 4HB, TMEM95 ಗಾಗಿ ಮತ್ತೊಂದು ಹೊಂದಾಣಿಕೆಯನ್ನು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದೆ.TMEM95, ಒಂದು ವೀರ್ಯ-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಮೆಂಬ್ರೇನ್ ಪ್ರೋಟೀನ್, 32,33 ಅನ್ನು ರದ್ದುಗೊಳಿಸಿದಾಗ ಪುರುಷ ಇಲಿಗಳನ್ನು ಬಂಜೆತನಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ.TMEM95 ಕೊರತೆಯಿರುವ ಸ್ಪರ್ಮಟೊಜೋವಾವು ಸಾಮಾನ್ಯ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ, ಚಲನಶೀಲತೆ ಮತ್ತು ಝೋನಾ ಪೆಲ್ಲುಸಿಡಾವನ್ನು ಭೇದಿಸುವ ಮತ್ತು ಮೊಟ್ಟೆಯ ಪೊರೆಯೊಂದಿಗೆ ಬಂಧಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿತ್ತು, ಆದರೆ ಓಸೈಟ್ ಪೊರೆಯೊಂದಿಗೆ ಬೆಸೆಯಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗಲಿಲ್ಲ.ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು TMEM95 IZUMO133 ನೊಂದಿಗೆ ರಚನಾತ್ಮಕ ಹೋಲಿಕೆಗಳನ್ನು ಹಂಚಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿವೆ.ವಾಸ್ತವವಾಗಿ, ಆಲ್ಫಾಫೋಲ್ಡ್ ಮಾದರಿಯು TMEM95 4HB ಆಗಿದೆ ಎಂದು ದೃಢಪಡಿಸಿದೆ ಮತ್ತು ಅದೇ ಜೋಡಿ CXXC ಮೋಟಿಫ್‌ಗಳನ್ನು IZUMO1 ಮತ್ತು SPACA6 ಮತ್ತು SPACA6 (Fig. 3a ಮತ್ತು S11) ನಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವ ಹೆಲಿಕ್ಸ್ 1 ಮತ್ತು 2 ನಡುವಿನ ಅದೇ ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.TMEM95 ಗೆ Ig ತರಹದ ಡೊಮೇನ್ ಇಲ್ಲದಿದ್ದರೂ, ಇದು SPACA6 ಮತ್ತು IZUMO1 ಹಿಂಜ್ ಪ್ರದೇಶಗಳಿಗೆ (Fig. 3b) ಹೋಲುವ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಾಂಡ್ ಮಾದರಿಯೊಂದಿಗೆ ಪ್ರದೇಶವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.ಈ ಹಸ್ತಪ್ರತಿಯ ಪ್ರಕಟಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಪ್ರಿಪ್ರಿಂಟ್ ಸರ್ವರ್ TMEM95 ರ ರಚನೆಯನ್ನು ವರದಿ ಮಾಡಿದೆ, ಇದು AlphaFold53 ಫಲಿತಾಂಶವನ್ನು ದೃಢೀಕರಿಸುತ್ತದೆ.TMEM95 SPACA6 ಮತ್ತು IZUMO1 ಗೆ ಹೋಲುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಈಗಾಗಲೇ ಉಭಯಚರಗಳಲ್ಲಿ ವಿಕಾಸಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಸಂರಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ (Fig. 4 ಮತ್ತು S13).
PSI-BLAST ಹುಡುಕಾಟವು NCBI SPACA6, IZUMO1-4, TMEM95, DCST1, DCST2, FIMP, ಮತ್ತು SOF1 ಡೇಟಾಬೇಸ್‌ಗಳನ್ನು ಜೀವನದ ಮರದಲ್ಲಿ ಈ ಅನುಕ್ರಮಗಳ ಸ್ಥಾನವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಬಳಸಿದೆ.ಶಾಖೆಯ ಬಿಂದುಗಳ ನಡುವಿನ ಅಂತರವನ್ನು ಅಳೆಯಲು ತೋರಿಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ.
SPACA6 ಮತ್ತು IZUMO1 ನಡುವಿನ ಗಮನಾರ್ಹವಾದ ಒಟ್ಟಾರೆ ರಚನಾತ್ಮಕ ಹೋಲಿಕೆಯು ಅವರು TMEM95 ಮತ್ತು IZUMO 2, 3 ಮತ್ತು 4 ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಸಂರಕ್ಷಿತ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸೂಪರ್‌ಫ್ಯಾಮಿಲಿಯ ಸ್ಥಾಪಕ ಸದಸ್ಯರಾಗಿದ್ದಾರೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.ತಿಳಿದಿರುವ ಸದಸ್ಯರು: IZUMO1, SPACA6 ಮತ್ತು TMEM95.ಕೆಲವೇ ಸದಸ್ಯರು Ig-ತರಹದ ಡೊಮೇನ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಕಾರಣ, IST ಸೂಪರ್‌ಫ್ಯಾಮಿಲಿಯ ವಿಶಿಷ್ಟ ಲಕ್ಷಣವೆಂದರೆ 4HB ಡೊಮೇನ್, ಇದು ಈ ಎಲ್ಲಾ ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳಿಗೆ ಸಾಮಾನ್ಯವಾದ ವಿಶಿಷ್ಟ ಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ: 1) ಸುರುಳಿಯಾಕಾರದ 4HB ಅನ್ನು ವಿರೋಧಿ ಸಮಾನಾಂತರ/ಸಮಾನಾಂತರ ಪರ್ಯಾಯದಲ್ಲಿ ಜೋಡಿಸಲಾಗಿದೆ (ಚಿತ್ರ . 5a), 2) ಬಂಡಲ್ ಒಂದು ತ್ರಿಕೋನ ಮುಖವನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದು, ಬಂಡಲ್‌ನೊಳಗೆ ಎರಡು ಹೆಲಿಕ್ಸ್ ಮತ್ತು ಮೂರನೇ ಲಂಬ ಹೆಲಿಕ್ಸ್ (Fig. ಕೀ ಪ್ರದೇಶ (Fig. 5c) ಥಿಯೋರೆಡಾಕ್ಸಿನ್ ತರಹದ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವ CXXC ಮೋಟಿಫ್ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ. ಒಂದು ರೆಡಾಕ್ಸ್ ಸಂವೇದಕ 54,55,56 , ಆದರೆ IST ಕುಟುಂಬದ ಸದಸ್ಯರಲ್ಲಿರುವ ಮೋಟಿಫ್ ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಸಮ್ಮಿಳನದಲ್ಲಿ ERp57 ನಂತಹ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಐಸೋಮರೇಸ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಬಹುದು. ಪಾತ್ರಗಳು 57,58 ಸಂಬಂಧಿತವಾಗಿವೆ.
IST ಸೂಪರ್‌ಫ್ಯಾಮಿಲಿಯ ಸದಸ್ಯರನ್ನು 4HB ಡೊಮೇನ್‌ನ ಮೂರು ವಿಶಿಷ್ಟ ಲಕ್ಷಣಗಳಿಂದ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲಾಗಿದೆ: ಸಮಾನಾಂತರ ಮತ್ತು ಆಂಟಿಪ್ಯಾರಲಲ್ ಓರಿಯಂಟೇಶನ್ ನಡುವೆ ಪರ್ಯಾಯವಾಗಿ ನಾಲ್ಕು ಹೆಲಿಕ್ಸ್, ಬಾ-ತ್ರಿಕೋನ ಸುರುಳಿಯಾಕಾರದ ಬಂಡಲ್ ಮುಖಗಳು ಮತ್ತು ಸಣ್ಣ ಅಣುಗಳ ನಡುವೆ ರೂಪುಗೊಂಡ ca CXXC ಡಬಲ್ ಮೋಟಿಫ್.) ಎನ್-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಹೆಲಿಕ್ಸ್ (ಕಿತ್ತಳೆ) ಮತ್ತು ಹಿಂಜ್ ಪ್ರದೇಶ β-ಹೇರ್‌ಪಿನ್ (ಹಸಿರು).
SPACA6 ಮತ್ತು IZUMO1 ನಡುವಿನ ಹೋಲಿಕೆಯನ್ನು ಗಮನಿಸಿದರೆ, ಹಿಂದಿನದು IZUMO1 ಅಥವಾ JUNO ಗೆ ಬಂಧಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು.ಬಯೋಲೇಯರ್ ಇಂಟರ್ಫೆರೊಮೆಟ್ರಿ (BLI) ಎಂಬುದು ಚಲನ-ಆಧಾರಿತ ಬೈಂಡಿಂಗ್ ವಿಧಾನವಾಗಿದ್ದು, ಇದನ್ನು ಹಿಂದೆ IZUMO1 ಮತ್ತು JUNO ನಡುವಿನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ.IZUMO1 ನೊಂದಿಗೆ ಬಯೋಟಿನ್-ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ಸಂವೇದಕವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯ JUNO ವಿಶ್ಲೇಷಕದೊಂದಿಗೆ ಬೆಟ್ ಆಗಿ ಕಾವು ಮಾಡಿದ ನಂತರ, ಬಲವಾದ ಸಂಕೇತವನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಯಿತು (Fig. S14a), ಸಂವೇದಕ ತುದಿಗೆ ಲಗತ್ತಿಸಲಾದ ಜೈವಿಕ ವಸ್ತುವಿನ ದಪ್ಪದಲ್ಲಿ ಬಂಧಿಸುವ-ಪ್ರೇರಿತ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.ಇದೇ ರೀತಿಯ ಸಂಕೇತಗಳು (ಅಂದರೆ, IZUMO1 ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ವಿರುದ್ಧ ಬೆಟ್‌ನಂತೆ ಸಂವೇದಕಕ್ಕೆ JUNO ಜೋಡಿಸಲಾಗಿದೆ) (Fig. S14b).SPACA6 ಅನ್ನು ಸಂವೇದಕ-ಬೌಂಡ್ IZUMO1 ಅಥವಾ ಸಂವೇದಕ-ಬೌಂಡ್ JUNO (ಚಿತ್ರ S14a,b) ವಿರುದ್ಧ ವಿಶ್ಲೇಷಕವಾಗಿ ಬಳಸಿದಾಗ ಯಾವುದೇ ಸಿಗ್ನಲ್ ಪತ್ತೆಯಾಗಿಲ್ಲ.ಈ ಸಂಕೇತದ ಅನುಪಸ್ಥಿತಿಯು SPACA6 ನ ಬಾಹ್ಯಕೋಶೀಯ ಡೊಮೇನ್ IZUMO1 ಅಥವಾ JUNO ನ ಬಾಹ್ಯಕೋಶೀಯ ಡೊಮೇನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಂವಹನ ನಡೆಸುವುದಿಲ್ಲ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
BLI ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಬೆಟ್ ಪ್ರೊಟೀನ್‌ನಲ್ಲಿ ಉಚಿತ ಲೈಸೈನ್ ಅವಶೇಷಗಳ ಬಯೋಟೈನೈಲೇಶನ್ ಅನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ, ಈ ಮಾರ್ಪಾಡು ಲೈಸಿನ್ ಅವಶೇಷಗಳು ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ತೊಡಗಿಸಿಕೊಂಡರೆ ಬಂಧಿಸುವುದನ್ನು ತಡೆಯಬಹುದು.ಇದರ ಜೊತೆಯಲ್ಲಿ, ಸಂವೇದಕಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಬೈಂಡಿಂಗ್‌ನ ದೃಷ್ಟಿಕೋನವು ಸ್ಟೆರಿಕ್ ಅಡೆತಡೆಗಳನ್ನು ರಚಿಸಬಹುದು, ಆದ್ದರಿಂದ ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಪುಲ್-ಡೌನ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು ಮರುಸಂಯೋಜಕ SPACA6, IZUMO1 ಮತ್ತು JUNO ಎಕ್ಟೋಡೋಮೈನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಸಹ ನಡೆಸಲಾಯಿತು.ಇದರ ಹೊರತಾಗಿಯೂ, SPACA6 ಅವನ-ಟ್ಯಾಗ್ ಮಾಡಲಾದ IZUMO1 ಅಥವಾ ಅವನ-ಟ್ಯಾಗ್ ಮಾಡಲಾದ JUNO (Fig. S14c,d) ನೊಂದಿಗೆ ಅವಕ್ಷೇಪವನ್ನು ಹೊಂದಿಲ್ಲ, ಇದು BLI ಪ್ರಯೋಗಗಳಲ್ಲಿ ಗಮನಿಸಿದ ಯಾವುದೇ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಸ್ಥಿರವಾಗಿ ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.ಸಕಾರಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿ, ನಾವು ಅವನ IZUMO1 (ಅಂಕಿ S14e ಮತ್ತು S15) ಎಂದು ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ JUNO ನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ದೃಢಪಡಿಸಿದ್ದೇವೆ.
SPACA6 ಮತ್ತು IZUMO1 ನಡುವಿನ ರಚನಾತ್ಮಕ ಹೋಲಿಕೆಯ ಹೊರತಾಗಿಯೂ, JUNO ಅನ್ನು ಬಂಧಿಸಲು SPACA6 ಅಸಮರ್ಥತೆ ಆಶ್ಚರ್ಯಕರವಲ್ಲ.ಮಾನವ IZUMO1 ನ ಮೇಲ್ಮೈಯು JUNO ನೊಂದಿಗೆ ಸಂವಹಿಸುವ 20 ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಅವಶೇಷಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಪ್ರತಿ ಮೂರು ಪ್ರದೇಶಗಳ ಅವಶೇಷಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ (ಅವುಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನವು ಹಿಂಜ್ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿವೆಯಾದರೂ) (Fig. S14f).ಈ ಅವಶೇಷಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದನ್ನು ಮಾತ್ರ SPACA6 (Glu70) ನಲ್ಲಿ ಸಂರಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ.ಅನೇಕ ಶೇಷ ಬದಲಿಗಳು ತಮ್ಮ ಮೂಲ ಜೀವರಾಸಾಯನಿಕ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಂಡಿದ್ದರೂ, IZUMO1 ನಲ್ಲಿನ ಅಗತ್ಯ Arg160 ಶೇಷವನ್ನು SPACA6 ನಲ್ಲಿ ಋಣಾತ್ಮಕ ಆವೇಶದ Asp148 ನಿಂದ ಬದಲಾಯಿಸಲಾಯಿತು;IZUMO1 ನಲ್ಲಿನ Arg160Glu ರೂಪಾಂತರವು JUNO43 ಗೆ ಬಂಧಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ರದ್ದುಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ.ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, IZUMO1 ಮತ್ತು SPACA6 ನಡುವಿನ ಡೊಮೇನ್ ದೃಷ್ಟಿಕೋನದಲ್ಲಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸವು SPACA6 (Fig. S14g) ನಲ್ಲಿ ಸಮಾನವಾದ ಪ್ರದೇಶದ JUNO-ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಸೈಟ್‌ನ ಮೇಲ್ಮೈ ವಿಸ್ತೀರ್ಣವನ್ನು ಗಣನೀಯವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು.
ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಸಮ್ಮಿಳನಕ್ಕಾಗಿ SPACA6 ಗಾಗಿ ತಿಳಿದಿರುವ ಅಗತ್ಯತೆ ಮತ್ತು IZUMO1 ಗೆ ಅದರ ಹೋಲಿಕೆಯ ಹೊರತಾಗಿಯೂ, SPACA6 ಸಮಾನವಾದ JUNO ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವಂತೆ ಕಂಡುಬರುವುದಿಲ್ಲ.ಆದ್ದರಿಂದ, ವಿಕಸನೀಯ ಜೀವಶಾಸ್ತ್ರವು ಒದಗಿಸಿದ ಪ್ರಾಮುಖ್ಯತೆಯ ಪುರಾವೆಗಳೊಂದಿಗೆ ನಮ್ಮ ರಚನಾತ್ಮಕ ಡೇಟಾವನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸಲು ನಾವು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿದ್ದೇವೆ.SPACA6 ಹೋಮೋಲಾಗ್‌ಗಳ ಅನುಕ್ರಮ ಜೋಡಣೆಯು ಸಸ್ತನಿಗಳನ್ನು ಮೀರಿದ ಸಾಮಾನ್ಯ ರಚನೆಯ ಸಂರಕ್ಷಣೆಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಸಿಸ್ಟೀನ್ ಅವಶೇಷಗಳು ದೂರದ ಸಂಬಂಧಿತ ಉಭಯಚರಗಳಲ್ಲಿಯೂ ಇರುತ್ತವೆ (ಚಿತ್ರ 6a).ConSurf ಸರ್ವರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, 66 ಅನುಕ್ರಮಗಳ ಬಹು ಅನುಕ್ರಮ ಜೋಡಣೆಯ ಧಾರಣ ಡೇಟಾವನ್ನು SPACA6 ಮೇಲ್ಮೈಗೆ ಮ್ಯಾಪ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ಈ ರೀತಿಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಪ್ರೋಟೀನ್ ವಿಕಸನದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಯಾವ ಅವಶೇಷಗಳನ್ನು ಸಂರಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಕಾರ್ಯದಲ್ಲಿ ಯಾವ ಮೇಲ್ಮೈ ಪ್ರದೇಶಗಳು ಪಾತ್ರವಹಿಸುತ್ತವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಸೂಚಿಸಬಹುದು.
CLUSTAL OMEGA ಬಳಸಿ ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಲಾದ 12 ವಿವಿಧ ಜಾತಿಗಳಿಂದ SPACA6 ಎಕ್ಟೋಡೋಮೈನ್‌ಗಳ ಅನುಕ್ರಮ ಜೋಡಣೆ.ಕಾನ್ಸರ್ಫ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಪ್ರಕಾರ, ಅತ್ಯಂತ ಸಂಪ್ರದಾಯವಾದಿ ಸ್ಥಾನಗಳನ್ನು ನೀಲಿ ಬಣ್ಣದಲ್ಲಿ ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ.ಸಿಸ್ಟೀನ್ ಅವಶೇಷಗಳನ್ನು ಕೆಂಪು ಬಣ್ಣದಲ್ಲಿ ಹೈಲೈಟ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ಡೊಮೇನ್ ಗಡಿಗಳು ಮತ್ತು ದ್ವಿತೀಯ ರಚನೆಯ ಅಂಶಗಳನ್ನು ಜೋಡಣೆಯ ಮೇಲ್ಭಾಗದಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅಲ್ಲಿ ಬಾಣಗಳು β- ಎಳೆಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಅಲೆಗಳು ಹೆಲಿಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ.ಅನುಕ್ರಮಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ NCBI ಪ್ರವೇಶ ಗುರುತಿಸುವಿಕೆಗಳು: ಮಾನವ (ಹೋಮೋ ಸೇಪಿಯನ್ಸ್, NP_001303901), ಮ್ಯಾಂಡ್ರಿಲ್ (ಮ್ಯಾಂಡ್ರಿಲಸ್ ಲ್ಯೂಕೋಫೇಯಸ್, XP_011821277), ಕ್ಯಾಪುಚಿನ್ ಮಂಕಿ (ಸೆಬಸ್ ಮಿಮಿಕ್, XP_017359360), 2 ಕುದುರೆ 2 ಕಿಲ್ಲರ್, le (Orcinus orca3_23 XP_032_034) .), ಕುರಿ (ಓವಿಸ್ ಮೇಷ, XP_014955560), ಆನೆ (ಲೋಕ್ಸೊಡೊಂಟಾ ಆಫ್ರಿಕಾನಾ, XP_010585293), ನಾಯಿ (ಕ್ಯಾನಿಸ್ ಲೂಪಸ್ ಫ್ಯಾಮಿಲಿಸ್, XP_025277208), ಇಲಿ (ಮಸ್ ಮಸ್ಕ್ಯುಲಸ್, NP_001156381), Tasharman6381, 156381 XP_0318), ಪ್ಲಾಟಿಪಸ್, 8) , 61_89 ಮತ್ತು ಬುಲ್‌ಫ್ರಾಗ್ (ಬುಫೊ ಬುಫೊ, XP_040282113).ಸಂಖ್ಯೆಯು ಮಾನವ ಕ್ರಮವನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ.b SPACA6 ರಚನೆಯ ಮೇಲ್ಮೈ ಪ್ರಾತಿನಿಧ್ಯವು ಮೇಲ್ಭಾಗದಲ್ಲಿ 4HB ಮತ್ತು ಕೆಳಭಾಗದಲ್ಲಿ Ig-ತರಹದ ಡೊಮೇನ್‌ನೊಂದಿಗೆ, ConSurf ಸರ್ವರ್‌ನಿಂದ ಸಂರಕ್ಷಣಾ ಅಂದಾಜಿನ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಬಣ್ಣಗಳು.ಉತ್ತಮವಾಗಿ ಸಂರಕ್ಷಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಭಾಗಗಳು ನೀಲಿ ಬಣ್ಣದಲ್ಲಿವೆ, ಮಧ್ಯಮವಾಗಿ ಸಂರಕ್ಷಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಭಾಗಗಳು ಬಿಳಿ ಬಣ್ಣದಲ್ಲಿವೆ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ಸಂರಕ್ಷಿಸಲ್ಪಟ್ಟವು ಹಳದಿ ಬಣ್ಣದಲ್ಲಿವೆ.ನೇರಳೆ ಸಿಸ್ಟೀನ್.ಉನ್ನತ ಮಟ್ಟದ ರಕ್ಷಣೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುವ ಮೂರು ಮೇಲ್ಮೈ ಪ್ಯಾಚ್‌ಗಳನ್ನು ಇನ್‌ಸೆಟ್ ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಿದ ಪ್ಯಾಚ್‌ಗಳು 1, 2 ಮತ್ತು 3 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. 4HB ಕಾರ್ಟೂನ್ ಅನ್ನು ಮೇಲಿನ ಬಲಭಾಗದಲ್ಲಿರುವ ಇನ್‌ಸೆಟ್‌ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ (ಅದೇ ಬಣ್ಣದ ಯೋಜನೆ).
SPACA6 ರಚನೆಯು ಮೂರು ಹೆಚ್ಚು ಸಂರಕ್ಷಿತ ಮೇಲ್ಮೈ ಪ್ರದೇಶಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ (Fig. 6b).ಪ್ಯಾಚ್ 1 4HB ಮತ್ತು ಹಿಂಜ್ ಪ್ರದೇಶವನ್ನು ವ್ಯಾಪಿಸಿದೆ ಮತ್ತು ಎರಡು ಸಂರಕ್ಷಿತ CXXC ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಸೇತುವೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಒಂದು Arg233-Glu132-Arg135-Ser144 ಹಿಂಜ್ ನೆಟ್ವರ್ಕ್ (Fig. S7), ಮತ್ತು ಮೂರು ಸಂರಕ್ಷಿತ ಬಾಹ್ಯ ಆರೊಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಅವಶೇಷಗಳು (Phe31, Tyr73, Phe1373)).Ig ತರಹದ ಡೊಮೇನ್‌ನ ವಿಶಾಲವಾದ ರಿಮ್ (Fig. S6e), ಇದು ವೀರ್ಯ ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿ ಹಲವಾರು ಧನಾತ್ಮಕ ಆವೇಶದ ಉಳಿಕೆಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತದೆ.ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, ಈ ಪ್ಯಾಚ್ ಪ್ರತಿಕಾಯ ಎಪಿಟೋಪ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಇದನ್ನು ಹಿಂದೆ SPACA6 30 ಕಾರ್ಯದಲ್ಲಿ ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪ ಮಾಡಲು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.ಪ್ರದೇಶ 3 ಹಿಂಜ್ ಮತ್ತು Ig ತರಹದ ಡೊಮೇನ್‌ನ ಒಂದು ಬದಿಯನ್ನು ವ್ಯಾಪಿಸಿದೆ;ಈ ಪ್ರದೇಶವು ಸಂರಕ್ಷಿತ ಪ್ರೋಲೈನ್‌ಗಳನ್ನು (Pro126, Pro127, Pro150, Pro154) ಮತ್ತು ಹೊರಮುಖವಾಗಿ ಎದುರಿಸುತ್ತಿರುವ ಧ್ರುವ/ಚಾರ್ಜ್ಡ್ ಅವಶೇಷಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ.ಆಶ್ಚರ್ಯಕರವಾಗಿ, 4HB ಯ ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿನ ಹೆಚ್ಚಿನ ಅವಶೇಷಗಳು ಹೆಚ್ಚು ವ್ಯತ್ಯಾಸಗೊಳ್ಳುತ್ತವೆ (Fig. 6b), ಆದರೂ ಪದರವನ್ನು SPACA6 ಹೋಮೋಲಾಗ್‌ನಾದ್ಯಂತ ಸಂರಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ (ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಬಂಡಲ್ ಕೋರ್‌ನ ಸಂಪ್ರದಾಯವಾದವು ಸೂಚಿಸಿದಂತೆ) ಮತ್ತು IST ಸೂಪರ್ ಫ್ಯಾಮಿಲಿಯನ್ನು ಮೀರಿ.
ಇದು SPACA6 ನಲ್ಲಿ ಅತಿ ಕಡಿಮೆ ಪತ್ತೆ ಮಾಡಬಹುದಾದ ದ್ವಿತೀಯ ರಚನೆಯ ಅಂಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಚಿಕ್ಕ ಪ್ರದೇಶವಾಗಿದ್ದರೂ, SPACA6 ಹೋಮೋಲಾಗ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಅನೇಕ ಹಿಂಜ್ ಪ್ರದೇಶದ ಅವಶೇಷಗಳನ್ನು (ಪ್ರದೇಶ 3 ಸೇರಿದಂತೆ) ಹೆಚ್ಚು ಸಂರಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು ಹೆಲಿಕಲ್ ಬಂಡಲ್ ಮತ್ತು β- ಸ್ಯಾಂಡ್‌ವಿಚ್‌ನ ದೃಷ್ಟಿಕೋನವು ಒಂದು ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.ಸಂಪ್ರದಾಯವಾದಿಯಾಗಿ.ಆದಾಗ್ಯೂ, SPACA6 ಮತ್ತು IZUMO1 ನ ಹಿಂಜ್ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿ ವ್ಯಾಪಕವಾದ ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಬಂಧ ಮತ್ತು ಸ್ಥಾಯೀವಿದ್ಯುತ್ತಿನ ಜಾಲಗಳ ಹೊರತಾಗಿಯೂ, ಸ್ವಾಭಾವಿಕ ನಮ್ಯತೆಯ ಪುರಾವೆಯನ್ನು IZUMO137,43,44 ರ ಬಹು ಅನುಮತಿಸಿದ ರಚನೆಗಳ ಜೋಡಣೆಯಲ್ಲಿ ಕಾಣಬಹುದು.ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಡೊಮೇನ್‌ಗಳ ಜೋಡಣೆಯು ಉತ್ತಮವಾಗಿ ಅತಿಕ್ರಮಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ, ಆದರೆ ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧಿತ ಡೊಮೇನ್‌ಗಳ ದೃಷ್ಟಿಕೋನವು ಕೇಂದ್ರ ಅಕ್ಷದಿಂದ 50 ° ನಿಂದ 70 ° ವರೆಗೆ ಬದಲಾಗುತ್ತದೆ (Fig. S16).ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ SPACA6 ರ ಹೊಂದಾಣಿಕೆಯ ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು, SAXS ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು (Fig. S17a,b).SPACA6 ಎಕ್ಟೋಡೋಮೈನ್‌ನ ಅಬ್ ಇನಿಶಿಯೊ ಪುನರ್ನಿರ್ಮಾಣವು ರಾಡ್ ಸ್ಫಟಿಕ ರಚನೆಗೆ (Fig. S18) ಅನುರೂಪವಾಗಿದೆ, ಆದರೂ ಕ್ರಾಟ್ಕಿ ಕಥಾವಸ್ತುವು ಸ್ವಲ್ಪ ಮಟ್ಟಿಗೆ ನಮ್ಯತೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ (Fig. S17b).ಈ ರಚನೆಯು IZUMO1 ನೊಂದಿಗೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿದೆ, ಇದರಲ್ಲಿ ಅನ್ಬೌಂಡ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಲ್ಯಾಟಿಸ್ ಮತ್ತು ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಬೂಮರಾಂಗ್ ಆಕಾರವನ್ನು ಪಡೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ43.
ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುವ ಪ್ರದೇಶವನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು, ಹೈಡ್ರೋಜನ್-ಡ್ಯೂಟೇರಿಯಮ್ ಎಕ್ಸ್ಚೇಂಜ್ ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (H-DXMS) ಅನ್ನು SPACA6 ನಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಹಿಂದೆ IZUMO143 (Fig. 7a,b) ನಲ್ಲಿ ಪಡೆದ ಡೇಟಾದೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.SPACA6 ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿ IZUMO1 ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಮೃದುವಾಗಿರುತ್ತದೆ, 100,000 ಸೆ ವಿನಿಮಯದ ನಂತರ ರಚನೆಯ ಉದ್ದಕ್ಕೂ ಹೆಚ್ಚಿನ ಡ್ಯೂಟೇರಿಯಮ್ ವಿನಿಮಯದಿಂದ ಸಾಕ್ಷಿಯಾಗಿದೆ.ಎರಡೂ ರಚನೆಗಳಲ್ಲಿ, ಹಿಂಜ್ ಪ್ರದೇಶದ C-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಭಾಗವು ಉನ್ನತ ಮಟ್ಟದ ವಿನಿಮಯವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಬಹುಶಃ 4HB ಮತ್ತು Ig-ತರಹದ ಡೊಮೇನ್‌ಗಳ ಸೀಮಿತ ತಿರುಗುವಿಕೆಯನ್ನು ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧಿಸುವಂತೆ ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆ.ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, 147CDLPLDCP154 ಶೇಷವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ SPACA6 ಹಿಂಜ್‌ನ C-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಭಾಗವು ಹೆಚ್ಚು ಸಂರಕ್ಷಿತ ಪ್ರದೇಶ 3 (Fig. 6b) ಆಗಿದೆ, ಇದು ಇಂಟರ್‌ಡೊಮೈನ್ ನಮ್ಯತೆಯು SPACA6 ನ ವಿಕಸನೀಯವಾಗಿ ಸಂರಕ್ಷಿತ ಲಕ್ಷಣವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.ನಮ್ಯತೆ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಪ್ರಕಾರ, ಸಿಡಿ ಥರ್ಮಲ್ ಮೆಲ್ಟ್ ಡೇಟಾವು SPACA6 (Tm = 51.2 ° C) IZUMO1 (Tm = 62.9 ° C) (Fig. S1e ಮತ್ತು S19) ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಸ್ಥಿರವಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ.
SPACA6 ಮತ್ತು b IZUMO1 ನ H-DXMS ಚಿತ್ರಗಳು.ಸೂಚಿಸಿದ ಸಮಯದ ಬಿಂದುಗಳಲ್ಲಿ ಶೇಕಡಾವಾರು ಡ್ಯೂಟೇರಿಯಮ್ ವಿನಿಮಯವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಹೈಡ್ರೋಜನ್-ಡ್ಯೂಟೇರಿಯಮ್ ವಿನಿಮಯದ ಮಟ್ಟವನ್ನು ನೀಲಿ (10%) ನಿಂದ ಕೆಂಪು (90%) ಗೆ ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ಬಣ್ಣದಿಂದ ಸೂಚಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಕಪ್ಪು ಪೆಟ್ಟಿಗೆಗಳು ಹೆಚ್ಚಿನ ವಿನಿಮಯದ ಪ್ರದೇಶಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತವೆ.ಸ್ಫಟಿಕ ರಚನೆಯಲ್ಲಿ ಗಮನಿಸಲಾದ 4HB, ಹಿಂಜ್ ಮತ್ತು Ig-ತರಹದ ಡೊಮೇನ್‌ನ ಗಡಿಗಳನ್ನು ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಅನುಕ್ರಮದ ಮೇಲೆ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.10 ಸೆ, 1000 ಸೆ, ಮತ್ತು 100,000 ಸೆಗಳಲ್ಲಿ ಡ್ಯೂಟೇರಿಯಮ್ ವಿನಿಮಯದ ಮಟ್ಟವನ್ನು SPACA6 ಮತ್ತು IZUMO1 ನ ಪಾರದರ್ಶಕ ಆಣ್ವಿಕ ಮೇಲ್ಮೈಗಳ ಮೇಲೆ ಅತಿಕ್ರಮಿಸಲಾದ ಪಟ್ಟಿಯ ಚಾರ್ಟ್‌ನಲ್ಲಿ ರೂಪಿಸಲಾಗಿದೆ.50% ಕ್ಕಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಡ್ಯೂಟೇರಿಯಮ್ ವಿನಿಮಯ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ರಚನೆಗಳ ಭಾಗಗಳು ಬಿಳಿ ಬಣ್ಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ.50% H-DXMS ವಿನಿಮಯಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರದೇಶಗಳನ್ನು ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ಬಣ್ಣಿಸಲಾಗಿದೆ.
CRISPR/Cas9 ಮತ್ತು ಮೌಸ್ ಜೀನ್ ನಾಕೌಟ್ ಆನುವಂಶಿಕ ತಂತ್ರಗಳ ಬಳಕೆಯು ವೀರ್ಯ ಮತ್ತು ಅಂಡಾಣು ಬಂಧಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಸಮ್ಮಿಳನಕ್ಕೆ ಪ್ರಮುಖವಾದ ಹಲವಾರು ಅಂಶಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಕಾರಣವಾಗಿದೆ.IZUMO1-JUNO ಮತ್ತು CD9 ರಚನೆಯ ಉತ್ತಮ-ಗುಣಮಟ್ಟದ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯ ಹೊರತಾಗಿ, ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಸಮ್ಮಿಳನಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು ರಚನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಮತ್ತು ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕವಾಗಿ ನಿಗೂಢವಾಗಿರುತ್ತವೆ.SPACA6 ನ ಜೈವಿಕ ಭೌತಿಕ ಮತ್ತು ರಚನಾತ್ಮಕ ಗುಣಲಕ್ಷಣವು ಫಲೀಕರಣದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ/ಸಮ್ಮಿಳನದ ಆಣ್ವಿಕ ಪಝಲ್‌ನ ಮತ್ತೊಂದು ಭಾಗವಾಗಿದೆ.
SPACA6 ಮತ್ತು IST ಸೂಪರ್‌ಕುಟುಂಬದ ಇತರ ಸದಸ್ಯರು ಸಸ್ತನಿಗಳು ಹಾಗೂ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಪಕ್ಷಿಗಳು, ಸರೀಸೃಪಗಳು ಮತ್ತು ಉಭಯಚರಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ಸಂರಕ್ಷಿಸಲ್ಪಟ್ಟಂತೆ ಕಂಡುಬರುತ್ತವೆ;ವಾಸ್ತವವಾಗಿ, ಜೀಬ್ರಾಫಿಶ್ 59 ರಲ್ಲಿ ಫಲೀಕರಣಕ್ಕೆ SPACA6 ಸಹ ಅಗತ್ಯವಿದೆ ಎಂದು ಭಾವಿಸಲಾಗಿದೆ. ಈ ವಿತರಣೆಯು DCST134, DCST234, FIMP31, ಮತ್ತು SOF132 ನಂತಹ ಇತರ ತಿಳಿದಿರುವ ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಸಮ್ಮಿಳನ-ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳಿಗೆ ಹೋಲುತ್ತದೆ, ಈ ಅಂಶಗಳು HAP2- ಕೊರತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ (ಸಹ GCS1 ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ) ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು ಅನೇಕ ಪ್ರೋಟಿಸ್ಟ್‌ಗಳ ವೇಗವರ್ಧಕ ಚಟುವಟಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗಿವೆ., ಸಸ್ಯಗಳು ಮತ್ತು ಆರ್ತ್ರೋಪಾಡ್ಗಳು.ಫಲವತ್ತಾದ ಸಮ್ಮಿಳನ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು 60, 61. SPACA6 ಮತ್ತು IZUMO1 ನಡುವಿನ ಬಲವಾದ ರಚನಾತ್ಮಕ ಹೋಲಿಕೆಯ ಹೊರತಾಗಿಯೂ, ಈ ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದನ್ನು ಎನ್‌ಕೋಡಿಂಗ್ ಮಾಡುವ ಜೀನ್‌ಗಳ ನಾಕ್‌ಔಟ್ ಗಂಡು ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ ಬಂಜೆತನಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು, ಇದು ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಸಮ್ಮಿಳನದಲ್ಲಿ ಅವುಗಳ ಕಾರ್ಯಗಳು ನಕಲು ಮಾಡಿಲ್ಲ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ..ಹೆಚ್ಚು ವಿಸ್ತಾರವಾಗಿ ಹೇಳುವುದಾದರೆ, ಸಮ್ಮಿಳನದ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯ ಹಂತಕ್ಕೆ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಯಾವುದೇ ತಿಳಿದಿರುವ ವೀರ್ಯ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು ಅನಗತ್ಯವಾಗಿರುವುದಿಲ್ಲ.
SPACA6 (ಮತ್ತು IST ಸೂಪರ್‌ಫ್ಯಾಮಿಲಿಯ ಇತರ ಸದಸ್ಯರು) ಇಂಟರ್‌ಗೇಮೆಟಿಕ್ ಜಂಕ್ಷನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಭಾಗವಹಿಸುತ್ತಾರೆಯೇ, ಪ್ರಮುಖ ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಸಮ್ಮಿಳನ ಬಿಂದುಗಳಿಗೆ ನೇಮಕ ಮಾಡಲು ಇಂಟ್ರಾಗ್ಯಾಮೆಟಿಕ್ ನೆಟ್‌ವರ್ಕ್‌ಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತಾರೆಯೇ ಅಥವಾ ಬಹುಶಃ ತಪ್ಪಿಸಿಕೊಳ್ಳುವ ಫ್ಯೂಸೋಜೆನ್‌ಗಳಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತಾರೆಯೇ ಎಂಬುದು ಮುಕ್ತ ಪ್ರಶ್ನೆಯಾಗಿ ಉಳಿದಿದೆ.HEK293T ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಸಹ-ಪ್ರತಿರೋಧಕ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಪೂರ್ಣ ಪ್ರಮಾಣದ IZUMO1 ಮತ್ತು SPACA632 ನಡುವಿನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿದವು.ಆದಾಗ್ಯೂ, ನಮ್ಮ ಮರುಸಂಯೋಜಿತ ಎಕ್ಟೋಡೋಮೈನ್‌ಗಳು ವಿಟ್ರೊದಲ್ಲಿ ಸಂವಹನ ನಡೆಸಲಿಲ್ಲ, ಇದು ನೋಡಾ ಮತ್ತು ಇತರರಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.ರಚನೆಯಲ್ಲಿ ಎರಡನ್ನೂ ಅಳಿಸಲಾಗಿದೆ (IZUMO1 ನ ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸ್ಮಿಕ್ ಬಾಲವನ್ನು ಗಮನಿಸಿ, ಇದು ಫಲೀಕರಣಕ್ಕೆ ಅನಗತ್ಯ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ62).ಪರ್ಯಾಯವಾಗಿ, IZUMO1 ಮತ್ತು/ಅಥವಾ SPACA6 ಗೆ ನಾವು ವಿಟ್ರೊದಲ್ಲಿ ಪುನರುತ್ಪಾದಿಸದ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಪರಿಸರದ ಅಗತ್ಯವಿರಬಹುದು, ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಶಾರೀರಿಕವಾಗಿ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾದ ಹೊಂದಾಣಿಕೆಗಳು ಅಥವಾ ಇತರ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಆಣ್ವಿಕ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳು (ತಿಳಿದಿರುವ ಅಥವಾ ಇನ್ನೂ ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಗಿಲ್ಲ).IZUMO1 ಎಕ್ಟೋಡೊಮೈನ್ ಪೆರಿವಿಟೆಲೈನ್ ಜಾಗದಲ್ಲಿ ಮೊಟ್ಟೆಗೆ ಸ್ಪರ್ಮಟಜೋವಾದ ಲಗತ್ತನ್ನು ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆ ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಂಬಲಾಗಿದೆ, SPACA6 ಎಕ್ಟೋಡೊಮೈನ್‌ನ ಉದ್ದೇಶವು ಅಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿದೆ.
SPACA6 ರ ರಚನೆಯು ಪ್ರೋಟೀನ್-ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಹಲವಾರು ಸಂರಕ್ಷಿತ ಮೇಲ್ಮೈಗಳನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸುತ್ತದೆ.CXXC ಮೋಟಿಫ್ (ಮೇಲಿನ ಪ್ಯಾಚ್ 1 ಅನ್ನು ಗೊತ್ತುಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ) ಗೆ ತಕ್ಷಣವೇ ಪಕ್ಕದಲ್ಲಿರುವ ಹಿಂಜ್ ಪ್ರದೇಶದ ಸಂರಕ್ಷಿತ ಭಾಗವು ಹಲವಾರು ಹೊರ-ಮುಖದ ಆರೊಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಅವಶೇಷಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಇದು ಜೈವಿಕ ಅಣುಗಳ ನಡುವಿನ ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಮತ್ತು π-ಸ್ಟ್ಯಾಕ್ ಮಾಡುವ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ.Ig-ತರಹದ ಡೊಮೇನ್ (ಪ್ರದೇಶ 2) ನ ವಿಶಾಲವಾದ ಬದಿಗಳು ಹೆಚ್ಚು ಸಂರಕ್ಷಿತ ಆರ್ಗ್ ಮತ್ತು ಅವನ ಶೇಷಗಳೊಂದಿಗೆ ಧನಾತ್ಮಕ ಆವೇಶದ ತೋಡು ರೂಪಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಈ ಪ್ರದೇಶದ ವಿರುದ್ಧ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳನ್ನು ಹಿಂದೆ ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಸಮ್ಮಿಳನ 30 ಅನ್ನು ನಿರ್ಬಂಧಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ.ಪ್ರತಿಕಾಯವು ರೇಖೀಯ ಎಪಿಟೋಪ್ 212RIRPAQLTHRGTFS225 ಅನ್ನು ಗುರುತಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಆರು ಅರ್ಜಿನೈನ್ ಅವಶೇಷಗಳಲ್ಲಿ ಮೂರು ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚು ಸಂರಕ್ಷಿತ His220 ಅನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.ಅಸಮರ್ಪಕ ಕ್ರಿಯೆಯು ಈ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಅವಶೇಷಗಳ ಅಥವಾ ಸಂಪೂರ್ಣ ಪ್ರದೇಶದ ನಿರ್ಬಂಧದ ಕಾರಣದಿಂದ ಉಂಟಾಗಿದೆಯೇ ಎಂಬುದು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿಲ್ಲ.β- ಸ್ಯಾಂಡ್‌ವಿಚ್‌ನ C-ಟರ್ಮಿನಸ್‌ನ ಸಮೀಪವಿರುವ ಈ ಅಂತರದ ಸ್ಥಳವು ನೆರೆಯ ವೀರ್ಯ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಿಸ್-ಸಂವಾದಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಓಸೈಟ್ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಲ್ಲ.ಇದಲ್ಲದೆ, ಹಿಂಜ್‌ನೊಳಗೆ ಹೆಚ್ಚು ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುವ ಪ್ರೋಲಿನ್-ಸಮೃದ್ಧ ಟ್ಯಾಂಗಲ್ (ಸೈಟ್ 3) ಅನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳುವುದು ಪ್ರೋಟೀನ್-ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯ ತಾಣವಾಗಿರಬಹುದು ಅಥವಾ ಹೆಚ್ಚಾಗಿ, ಎರಡು ಡೊಮೇನ್‌ಗಳ ನಡುವಿನ ನಮ್ಯತೆಯ ಧಾರಣವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.SPACA6 ನ ಅಜ್ಞಾತ ಪಾತ್ರಕ್ಕೆ ಲಿಂಗವು ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ.ಗ್ಯಾಮೆಟ್ಗಳ ಸಮ್ಮಿಳನ.
SPACA6 Ig-ರೀತಿಯ β- ಸ್ಯಾಂಡ್‌ವಿಚ್‌ಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ ಇಂಟರ್ ಸೆಲ್ಯುಲರ್ ಅಡ್ಹೆಶನ್ ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.ಅನೇಕ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವ ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳು (ಉದಾ, ಕ್ಯಾಥರಿನ್‌ಗಳು, ಇಂಟಿಗ್ರಿನ್‌ಗಳು, ಅಡೆಸಿನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು IZUMO1) ಒಂದು ಅಥವಾ ಹೆಚ್ಚಿನ β-ಸ್ಯಾಂಡ್‌ವಿಚ್ ಡೊಮೇನ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದು ಅದು ಜೀವಕೋಶ ಪೊರೆಯಿಂದ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಅವುಗಳ ಪರಿಸರದ ಗುರಿಗಳಿಗೆ ವಿಸ್ತರಿಸುತ್ತದೆ63,64,65.SPACA6 ನ Ig-ತರಹದ ಡೊಮೇನ್ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಒಗ್ಗೂಡಿಸುವಿಕೆಯ β- ಸ್ಯಾಂಡ್‌ವಿಚ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವ ಒಂದು ಲಕ್ಷಣವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ: β- ಸ್ಯಾಂಡ್‌ವಿಚ್‌ಗಳ ತುದಿಯಲ್ಲಿರುವ ಸಮಾನಾಂತರ ಎಳೆಗಳ ದ್ವಿಗುಣಗಳು, ಇದನ್ನು ಮೆಕ್ಯಾನಿಕಲ್ ಕ್ಲಾಂಪ್‌ಗಳು ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.ಈ ಮೋಟಿಫ್ ಬರಿಯ ಪಡೆಗಳಿಗೆ ಪ್ರತಿರೋಧವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಂಬಲಾಗಿದೆ, ಇದು ಇಂಟರ್ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಸಂವಹನಗಳಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳಿಗೆ ಮೌಲ್ಯಯುತವಾಗಿದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಅಡೆಸಿನ್‌ಗಳಿಗೆ ಈ ಹೋಲಿಕೆಯ ಹೊರತಾಗಿಯೂ, SPACA6 ಮೊಟ್ಟೆಯ ಬಿಳಿಭಾಗದೊಂದಿಗೆ ಸಂವಹನ ನಡೆಸುತ್ತದೆ ಎಂಬುದಕ್ಕೆ ಪ್ರಸ್ತುತ ಯಾವುದೇ ಪುರಾವೆಗಳಿಲ್ಲ.SPACA6 ಎಕ್ಟೋಡೊಮೈನ್ JUNO ಗೆ ಬಂಧಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ, ಮತ್ತು SPACA6-ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ರೆಸ್ ಮಾಡುವ HEK293T ಕೋಶಗಳು, ಇಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ, ಜೋನಾ 32 ಕೊರತೆಯಿರುವ ಓಸೈಟ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಷ್ಟೇನೂ ಸಂವಹನ ನಡೆಸುವುದಿಲ್ಲ.SPACA6 ಇಂಟರ್‌ಗೇಮೆಟಿಕ್ ಬಂಧಗಳನ್ನು ಸ್ಥಾಪಿಸಿದರೆ, ಈ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗೆ ಅನುವಾದದ ನಂತರದ ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳು ಬೇಕಾಗಬಹುದು ಅಥವಾ ಇತರ ವೀರ್ಯ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳಿಂದ ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸಬಹುದು.ನಂತರದ ಊಹೆಗೆ ಬೆಂಬಲವಾಗಿ, IZUMO1-ಕೊರತೆಯ ಸ್ಪೆರ್ಮಟೊಜೋವಾ ಅಂಡಾಣುಗಳಿಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ, IZUMO1 ಹೊರತುಪಡಿಸಿ ಇತರ ಅಣುಗಳು ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯ ಹಂತ 27 ರಲ್ಲಿ ತೊಡಗಿಕೊಂಡಿವೆ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.
ಅನೇಕ ವೈರಲ್, ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಮತ್ತು ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಸಮ್ಮಿಳನ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು ಫ್ಯೂಸೋಜೆನ್‌ಗಳಂತೆ ತಮ್ಮ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಊಹಿಸುವ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ.ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ವೈರಲ್ ಸಮ್ಮಿಳನ ಗ್ಲೈಕೊಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು (ವರ್ಗಗಳು I, II ಮತ್ತು III) ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಸಮ್ಮಿಳನ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಅಥವಾ ಲೂಪ್ ಅನ್ನು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ, ಇದನ್ನು ಹೋಸ್ಟ್ ಮೆಂಬರೇನ್‌ಗೆ ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.IZUMO143 ನ ಹೈಡ್ರೋಫಿಲಿಸಿಟಿ ನಕ್ಷೆ ಮತ್ತು IST ಸೂಪರ್‌ಫ್ಯಾಮಿಲಿಯ ರಚನೆ (ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಊಹಿಸಲಾಗಿದೆ) ಯಾವುದೇ ಸ್ಪಷ್ಟವಾದ ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಫ್ಯೂಷನ್ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಅನ್ನು ತೋರಿಸಲಿಲ್ಲ.ಹೀಗಾಗಿ, IST ಸೂಪರ್‌ಫ್ಯಾಮಿಲಿಯಲ್ಲಿನ ಯಾವುದೇ ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳು ಫ್ಯೂಸೋಜೆನ್‌ಗಳಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಿದರೆ, ಅವುಗಳು ತಿಳಿದಿರುವ ಇತರ ಉದಾಹರಣೆಗಳಿಗಿಂತ ಭಿನ್ನವಾದ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತವೆ.
ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ, ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಸಮ್ಮಿಳನಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳ IST ಸೂಪರ್‌ಫ್ಯಾಮಿಲಿ ಸದಸ್ಯರ ಕಾರ್ಯಗಳು ಪ್ರಲೋಭನಗೊಳಿಸುವ ರಹಸ್ಯವಾಗಿ ಉಳಿದಿವೆ.ನಮ್ಮ ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ SPACA6 ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಅಣು ಮತ್ತು ಅದರ ಪರಿಹರಿಸಿದ ರಚನೆಯು ಈ ಹಂಚಿಕೆಯ ರಚನೆಗಳ ನಡುವಿನ ಸಂಬಂಧಗಳು ಮತ್ತು ಗ್ಯಾಮೆಟ್ ಲಗತ್ತು ಮತ್ತು ಸಮ್ಮಿಳನದಲ್ಲಿ ಅವುಗಳ ಪಾತ್ರದ ಒಳನೋಟವನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ.
ಊಹಿಸಲಾದ ಮಾನವ SPACA6 ಎಕ್ಟೋಡೊಮೈನ್‌ಗೆ ಅನುಗುಣವಾದ DNA ಅನುಕ್ರಮವು (NCBI ಪ್ರವೇಶ ಸಂಖ್ಯೆ NP_001303901.1; ಅವಶೇಷಗಳು 27-246) ಡ್ರೊಸೊಫಿಲಾ ಮೆಲನೊಗ್ಯಾಸ್ಟರ್ S2 ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಗೆ ಕೋಡಾನ್-ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಕೋಡಾನ್-ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ., BiP ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆಯ ಸಂಕೇತ ಮತ್ತು ಅನುಗುಣವಾದ 5′ ಮತ್ತು 3′ ಈ ವಂಶವಾಹಿಯ ಬಂಧನ-ಸ್ವತಂತ್ರ ಅಬೀಜ ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿಗಾಗಿ pMT ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ವೆಕ್ಟರ್‌ಗೆ ಮೆಟಾಲೋಥಿಯೋನಿನ್ ಪ್ರವರ್ತಕವನ್ನು ಆಧರಿಸಿ puromycin (pMT-puro) ಆಯ್ಕೆಗಾಗಿ ಮಾರ್ಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ.pMT-puro ವೆಕ್ಟರ್ 10x-His C-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಟ್ಯಾಗ್ (ಚಿತ್ರ S2) ನಂತರ ಥ್ರಂಬಿನ್ ಕ್ಲೀವೇಜ್ ಸೈಟ್ ಅನ್ನು ಎನ್ಕೋಡ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
SPACA6 pMT-puro ವೆಕ್ಟರ್‌ನ D. ಮೆಲನೊಗ್ಯಾಸ್ಟರ್ S2 (ಗಿಬ್ಕೊ) ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಸ್ಥಿರವಾದ ವರ್ಗಾವಣೆಯನ್ನು IZUMO1 ಮತ್ತು JUNO43 ಗಾಗಿ ಬಳಸುವ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್‌ನಂತೆಯೇ ನಡೆಸಲಾಯಿತು.S2 ಕೋಶಗಳನ್ನು 10% (v/v) ಶಾಖ-ನಿಷ್ಕ್ರಿಯ ಭ್ರೂಣದ ಸೀರಮ್ (ಗಿಬ್ಕೊ) ಮತ್ತು 1X ಆಂಟಿಮೈಕೋಟಿಕ್ ಪ್ರತಿಜೀವಕ (ಗಿಬ್ಕೊ) ನ ಅಂತಿಮ ಸಾಂದ್ರತೆಯೊಂದಿಗೆ ಷ್ನೇಯ್ಡರ್‌ನ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ (ಗಿಬ್ಕೊ) ಕರಗಿಸಿ ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು.ಆರಂಭಿಕ ಅಂಗೀಕಾರದ ಕೋಶಗಳು (3.0 x 106 ಕೋಶಗಳು) 6-ಬಾವಿ ಫಲಕಗಳ (ಕಾರ್ನಿಂಗ್) ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಬಾವಿಗಳಲ್ಲಿ ಲೇಪಿತವಾಗಿವೆ.27 ° C ನಲ್ಲಿ 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾವು ನಂತರ, ತಯಾರಕರ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ ಪ್ರಕಾರ SPACA6 pMT-puro ವೆಕ್ಟರ್ ಮತ್ತು Effectene ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಫೆಕ್ಷನ್ ಕಾರಕ (Qiagen) ನ 2 mg ಮಿಶ್ರಣದೊಂದಿಗೆ ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಯಿತು.ವರ್ಗಾವಣೆಗೊಂಡ ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು 72 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ 6 mg/ml puromycin ನೊಂದಿಗೆ ಕೊಯ್ಲು ಮಾಡಲಾಯಿತು.ನಂತರ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣ ಷ್ನೇಯ್ಡರ್ ಮಾಧ್ಯಮದಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ದೊಡ್ಡ ಪ್ರಮಾಣದ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಉತ್ಪಾದನೆಗಾಗಿ ಸೀರಮ್ ಮುಕ್ತ ಕೀಟ-XPRESS ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ (ಲೋನ್ಜಾ) ಇರಿಸಲಾಯಿತು.1 L ಬ್ಯಾಚ್ S2 ಸೆಲ್ ಕಲ್ಚರ್ ಅನ್ನು 2 L ಗಾಳಿಯಾಡುವ ಫ್ಲಾಟ್-ಬಾಟಮ್ ಪಾಲಿಪ್ರೊಪಿಲೀನ್ ಎರ್ಲೆನ್‌ಮೇಯರ್ ಫ್ಲಾಸ್ಕ್‌ನಲ್ಲಿ 8-10 × 106 ml-1 ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ನಂತರ 500 µM CuSO4 (ಮಿಲ್ಲಿಪೋರ್ ಸಿಗ್ಮಾ) ಮತ್ತು ಫಿಲ್ಟರ್ ಮಾಡಿದ ಅಂತಿಮ ಸಾಂದ್ರತೆಯೊಂದಿಗೆ ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು.ಪ್ರಚೋದಿಸಿತು.ಪ್ರೇರಿತ ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳನ್ನು 27 ° C. 120 rpm ನಲ್ಲಿ ನಾಲ್ಕು ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ.
SPACA6 ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ನಿಯಮಾಧೀನ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು 4 °C ನಲ್ಲಿ 5660×g ನಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ನಂತರ 10 kDa MWCO ಮೆಂಬರೇನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸೆಂಟ್ರಮೇಟ್ ಟ್ಯಾಂಜೆನ್ಶಿಯಲ್ ಫ್ಲೋ ಫಿಲ್ಟರೇಶನ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ (ಪಾಲ್ ಕಾರ್ಪ್).SPACA6 ಹೊಂದಿರುವ ಸಾಂದ್ರೀಕೃತ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು 2 ಮಿಲಿ Ni-NTA ಅಗರೋಸ್ ರೆಸಿನ್ (ಕಿಯಾಜೆನ್) ಕಾಲಮ್‌ಗೆ ಅನ್ವಯಿಸಿ.Ni-NTA ರಾಳವನ್ನು ಬಫರ್ A ಯ 10 ಕಾಲಮ್ ವಾಲ್ಯೂಮ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ (CV) ತೊಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ 50 mM ನ ಅಂತಿಮ ಇಮಿಡಾಜೋಲ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ನೀಡಲು ಬಫರ್ A ಯ 1 CV ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು.SPACA6 ಅನ್ನು 10 ಮಿಲಿ ಬಫರ್ A ಯೊಂದಿಗೆ 500 mM ನ ಅಂತಿಮ ಸಾಂದ್ರತೆಗೆ ಇಮಿಡಾಜೋಲ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಪೂರಕಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ.ನಿರ್ಬಂಧಿತ ವರ್ಗದ ಥ್ರಂಬಿನ್ (ಮಿಲ್ಲಿಪೋರ್ ಸಿಗ್ಮಾ) ಅನ್ನು ಡಯಾಲಿಸಿಸ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗೆ (MWCO 12-14 kDa) ನೇರವಾಗಿ ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು. ಪ್ರತಿ mg SPACA6 ವಿರುದ್ಧ 1 L 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 ಮತ್ತು 150 mM NaCl (ಬಫರ್ B) ಡಯಾಲಿಸಿಸ್‌ಗೆ.48 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 4 ° C ನಲ್ಲಿ.ಥ್ರಂಬಿನ್-ಕ್ಲೀವ್ಡ್ SPACA6 ಅನ್ನು ಉಪ್ಪು ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಮೂರು ಪಟ್ಟು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 ನೊಂದಿಗೆ ಸಮೀಕರಿಸಲಾದ 1 ml MonoS 5/50 GL ಕ್ಯಾಷನ್ ಎಕ್ಸ್‌ಚೇಂಜ್ ಕಾಲಮ್ (Cytiva/GE) ಗೆ ಲೋಡ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು.ಕ್ಯಾಶನ್ ವಿನಿಮಯಕಾರಕವನ್ನು 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 ನ 3 CV ಯಿಂದ ತೊಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ, ನಂತರ SPACA6 ಅನ್ನು 0 ರಿಂದ 500 mM NaCl ನ ರೇಖೀಯ ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್‌ನೊಂದಿಗೆ 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 ಗಾಗಿ 25 CV ನೊಂದಿಗೆ ಹೊರಹಾಕಲಾಯಿತು.ಅಯಾನ್ ಎಕ್ಸ್‌ಚೇಂಜ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯ ನಂತರ, SPACA6 ಅನ್ನು 1 ml ಗೆ ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ENrich SEC650 10 x 300 ಕಾಲಮ್‌ನಿಂದ (BioRad) ಸಮಸ್ಥಿತಿಗೆ ಬಫರ್ B. ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಮ್ ಪ್ರಕಾರ, ಪೂಲ್ ಮತ್ತು SPACA6 ಹೊಂದಿರುವ ಭಿನ್ನರಾಶಿಗಳನ್ನು ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸುತ್ತದೆ.16% SDS-ಪಾಲಿಅಕ್ರಿಲಮೈಡ್ ಜೆಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಕೂಮಾಸ್ಸಿ-ಸ್ಟೇನ್ಡ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್‌ನಿಂದ ಶುದ್ಧತೆಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಬಿಯರ್-ಲ್ಯಾಂಬರ್ಟ್ ಕಾನೂನು ಮತ್ತು ಸೈದ್ಧಾಂತಿಕ ಮೋಲಾರ್ ಅಳಿವಿನ ಗುಣಾಂಕವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು 280 nm ನಲ್ಲಿ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ SPACA6 ಅನ್ನು ರಾತ್ರಿಯಲ್ಲಿ 10 mM ಸೋಡಿಯಂ ಫಾಸ್ಫೇಟ್, pH 7.4 ಮತ್ತು 150 mM NaF ವಿರುದ್ಧ ಡಯಾಲೈಸ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು CD ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯಿಂದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗೆ ಮುಂಚಿತವಾಗಿ 0.16 mg/mL ಗೆ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು.185 ರಿಂದ 260 nm ತರಂಗಾಂತರದ CD ಗಳ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರಲ್ ಸ್ಕ್ಯಾನಿಂಗ್ ಅನ್ನು Jasco J-1500 ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಪೋಲಾರಿಮೀಟರ್‌ನಲ್ಲಿ 1 mm ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಪಥ್ ಉದ್ದ (ಹೆಲ್ಮಾ) ಜೊತೆಗೆ 25 ° C ನಲ್ಲಿ 50 nm/min ದರದಲ್ಲಿ ಕ್ವಾರ್ಟ್ಜ್ ಕ್ಯೂವೆಟ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗಿದೆ.CD ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರಾವನ್ನು ಬೇಸ್‌ಲೈನ್ ಸರಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ, ಸರಾಸರಿ 10 ಸ್ವಾಧೀನಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಡಿಗ್ರಿ cm2/dmol ನಲ್ಲಿ ಉಳಿದಿರುವ ದೀರ್ಘವೃತ್ತ (θMRE) ಗೆ ಪರಿವರ್ತಿಸಲಾಗಿದೆ:
ಇಲ್ಲಿ MW ಎಂಬುದು Da ನಲ್ಲಿನ ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿಯ ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕವಾಗಿದೆ;N ಎಂಬುದು ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳ ಸಂಖ್ಯೆ;θ ಮಿಲಿಡಿಗ್ರಿಗಳಲ್ಲಿ ದೀರ್ಘವೃತ್ತವಾಗಿದೆ;d cm ನಲ್ಲಿ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಪಥದ ಉದ್ದಕ್ಕೆ ಅನುರೂಪವಾಗಿದೆ;ಘಟಕಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ.