ASTM A790 2507 / 2205 1.4462 / 1.4410 ಡ್ಯುಪ್ಲೆಕ್ಸ್ ವೆಲ್ಡೆಡ್ ಟ್ಯೂಬ್ ಫಾರ್ ಕೆಮಿಕಲ್ ಇಂಡಸ್ಟ್ರಿ ರಾಸಾಯನಿಕ ಘಟಕ, SPECC1L ನ ಕೊರತೆಯು ವಿಭಜಿತ ಕೀಲುಗಳ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಕಪಾಲದ ನರ ಕ್ರೆಸ್ಟ್ ಕೋಶಗಳ ಚೆಲ್ಲುವಿಕೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

Nature.com ಗೆ ಭೇಟಿ ನೀಡಿದ್ದಕ್ಕಾಗಿ ಧನ್ಯವಾದಗಳು.ನೀವು ಸೀಮಿತ CSS ಬೆಂಬಲದೊಂದಿಗೆ ಬ್ರೌಸರ್ ಆವೃತ್ತಿಯನ್ನು ಬಳಸುತ್ತಿರುವಿರಿ.ಉತ್ತಮ ಅನುಭವಕ್ಕಾಗಿ, ನೀವು ನವೀಕರಿಸಿದ ಬ್ರೌಸರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲು ನಾವು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡುತ್ತೇವೆ (ಅಥವಾ ಇಂಟರ್ನೆಟ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ಲೋರರ್‌ನಲ್ಲಿ ಹೊಂದಾಣಿಕೆ ಮೋಡ್ ಅನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಿ).ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ನಡೆಯುತ್ತಿರುವ ಬೆಂಬಲವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು, ನಾವು ಶೈಲಿಗಳು ಮತ್ತು JavaScript ಇಲ್ಲದೆ ಸೈಟ್ ಅನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತೇವೆ.

ASTM A790 2507 / 2205 1.4462 / 1.4410 ರಾಸಾಯನಿಕ ಉದ್ಯಮಕ್ಕಾಗಿ ಡ್ಯುಪ್ಲೆಕ್ಸ್ ವೆಲ್ಡೆಡ್ ಟ್ಯೂಬ್

ಲಿಯಾಚೆಂಗ್ ಸಿಹೆ SS ಮೆಟೀರಿಯಲ್ ಕಂ., ಲಿಮಿಟೆಡ್.ಸ್ಟೇನ್‌ಲೆಸ್ ಸ್ಟೀಲ್ ಸೀಮ್‌ಲೆಸ್ ಪೈಪ್‌ಗಳು, ಬ್ರೈಟ್ ಅನೆಲ್ಡ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳು, ಸೀಮ್‌ಲೆಸ್ ಕಾಯಿಲ್ಡ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳು ಇತ್ಯಾದಿಗಳಲ್ಲಿ ಪರಿಣತಿ ಹೊಂದಿರುವ ಪ್ರಮುಖ ತಯಾರಕ.ಗ್ರಾಹಕರಿಗೆ ಅನುಕೂಲವಾಗುವಂತೆ, ನಾವು ಬೆಸುಗೆ ಹಾಕಿದ ಪೈಪ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳನ್ನು ಸಹ ಹೊಂದಿದ್ದೇವೆ.ಲಿಯಾಚೆಂಗ್ ಸಿಹೆ SS ಮೆಟೀರಿಯಲ್ ಕಂ., ಲಿಮಿಟೆಡ್.ಅತ್ಯಾಧುನಿಕ ಉತ್ಪಾದನಾ ಮತ್ತು ಪರೀಕ್ಷಾ ಸಾಧನಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.ನಿಮ್ಮ ಅಗತ್ಯವನ್ನು ನಾವು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಪೂರೈಸಬಹುದು.ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ ಪ್ರಕಾರ ಕಟ್ಟುನಿಟ್ಟಾಗಿ, ನಾವು ಉತ್ಪಾದಿಸುವ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳು ಯಾವಾಗಲೂ ಸರಿಯಾದ OD ಮತ್ತು WT ಸಹಿಷ್ಣುತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ.ಸಹಿಷ್ಣುತೆಯ ನಿಯಂತ್ರಣವು ಮಾನದಂಡಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಕಟ್ಟುನಿಟ್ಟಾಗಿ ಅನುಗುಣವಾಗಿರುತ್ತದೆ.ನಮ್ಮ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಯಾವಾಗಲೂ ಗ್ರಾಹಕರೊಂದಿಗೆ ತೃಪ್ತವಾಗಿರುತ್ತವೆ.ನಮ್ಮ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಖರೀದಿಸಿದ ಗ್ರಾಹಕರು ಹೆಚ್ಚಿನ ಲಾಭವನ್ನು ಸೃಷ್ಟಿಸಿದ್ದಾರೆ.
a) OD (ಹೊರ ವ್ಯಾಸ) : 3.18mm ನಿಂದ 101.6mm
b) WT (ಗೋಡೆಯ ದಪ್ಪ) : 0.5mm ನಿಂದ 20mm
ಸಿ) ಉದ್ದ: ಗ್ರಾಹಕರ ಅವಶ್ಯಕತೆಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ
ಡಿ) ಮಾನದಂಡಗಳು : ASTM A312;ASTM A269;ASTM A789;ASTM A790 ಇತ್ಯಾದಿ
ಇ) ಪ್ರಕ್ರಿಯೆ ವಿಧಾನ: ERW, EFW ಇತ್ಯಾದಿ

ಪ್ರತಿ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗೆ ಮೂರು ಲೇಖನಗಳನ್ನು ತೋರಿಸುವ ಸ್ಲೈಡರ್‌ಗಳು.ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳ ಮೂಲಕ ಚಲಿಸಲು ಹಿಂದಿನ ಮತ್ತು ಮುಂದಿನ ಬಟನ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ ಅಥವಾ ಪ್ರತಿ ಸ್ಲೈಡ್ ಮೂಲಕ ಚಲಿಸಲು ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ ಸ್ಲೈಡ್ ನಿಯಂತ್ರಕ ಬಟನ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ.
ಕ್ರೇನಿಯಲ್ ನ್ಯೂರಲ್ ಕ್ರೆಸ್ಟ್ ಕೋಶಗಳು (CNCC) ಭ್ರೂಣದ ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳನ್ನು ನಿಧಾನಗೊಳಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಫಾರಂಜಿಲ್ ಕಮಾನುಗಳಿಗೆ ವಲಸೆ ಹೋಗುತ್ತವೆ, ಇದು ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಧ್ಯದ ರಚನೆಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ.ಸಿಎನ್‌ಸಿಸಿ ಅಪಸಾಮಾನ್ಯ ಕ್ರಿಯೆಯು ಓರೊಫೇಶಿಯಲ್ ಸೀಳು, ಸಾಮಾನ್ಯ ಜನ್ಮಜಾತ ವಿರೂಪತೆಯ ಎಟಿಯಾಲಜಿಯಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ.ವಿಲಕ್ಷಣ ಮತ್ತು ಸಿಂಡ್ರೊಮಿಕ್ ಸೀಳುಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಟೆರೋಜೈಗಸ್ SPECC1L ರೂಪಾಂತರಗಳು ಕಂಡುಬಂದಿವೆ.ಇಲ್ಲಿ, ಕಲ್ಚರ್ಡ್ SPECC1L ನಾಕ್‌ಡೌನ್ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಕ್ಯಾನೊನಿಕಲ್ ಅಡ್ಹೆಸಿವ್ ಜಂಕ್ಷನ್ (AJ) ಘಟಕಗಳು, β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ ಮತ್ತು ಇ-ಕ್ಯಾಥರಿನ್‌ಗಳ ವರ್ಧಿತ ಕಲೆಗಳನ್ನು ನಾವು ವರದಿ ಮಾಡುತ್ತೇವೆ ಮತ್ತು ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಗ್ರಾಫ್‌ಗಳು AJ ನ ಅಪಿಕಲ್-ಬೇಸಲ್ ಡಿಫ್ಯೂಷನ್ ಅನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ.ಕ್ರಾನಿಯೊಫೇಶಿಯಲ್ ಮಾರ್ಫೋಜೆನೆಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ SPECC1L ಪಾತ್ರವನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು, ನಾವು Specc1l ಕೊರತೆಯ ಮೌಸ್ ಮಾದರಿಯನ್ನು ರಚಿಸಿದ್ದೇವೆ.ಹೋಮೋಜೈಗಸ್ ಮ್ಯಟೆಂಟ್‌ಗಳು ಭ್ರೂಣದ ಮಾರಕ ಮತ್ತು ದುರ್ಬಲಗೊಂಡ ನರ ಕೊಳವೆ ಮುಚ್ಚುವಿಕೆ ಮತ್ತು CNCC ಲ್ಯಾಮಿನೇಶನ್ ಅನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತವೆ.ರೂಪಾಂತರಿತ ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ AJ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸ್ಟೈನಿಂಗ್ ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ.ಈ AJ ದೋಷವು CNCC ಡಿಲಾಮಿನೇಷನ್‌ನಲ್ಲಿನ ದೋಷದೊಂದಿಗೆ ಸ್ಥಿರವಾಗಿದೆ, AJ ವಿಸರ್ಜನೆಯ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ.ಜೊತೆಗೆ, Specc11 ರೂಪಾಂತರಿತ ರೂಪಗಳು PI3K-AKT ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿದೆ ಮತ್ತು ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿವೆ.ವಿಟ್ರೊದಲ್ಲಿ, ವೈಲ್ಡ್-ಟೈಪ್ ಸೆಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ PI3K-AKT ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್‌ನ ಸೌಮ್ಯವಾದ ಪ್ರತಿಬಂಧವು AJ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಲು ಸಾಕಾಗಿತ್ತು.ಮುಖ್ಯವಾಗಿ, SPECC1L ನಾಕ್‌ಡೌನ್‌ನಿಂದ ಪ್ರೇರಿತವಾದ AJ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು PI3K-AKT ಮಾರ್ಗವನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಮೂಲಕ ಹಿಂತಿರುಗಿಸಬಹುದು.ಒಟ್ಟಾಗಿ ತೆಗೆದುಕೊಂಡರೆ, ಈ ಡೇಟಾವು SPECC1L, PI3K-AKT ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಮತ್ತು AJ ಜೀವಶಾಸ್ತ್ರದ ಒಂದು ಕಾದಂಬರಿ ನಿಯಂತ್ರಕವಾಗಿ, ನರ ಕೊಳವೆಯ ಮುಚ್ಚುವಿಕೆ ಮತ್ತು CNCC ಶ್ರೇಣೀಕರಣಕ್ಕೆ ಅಗತ್ಯವಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ಕ್ರೇನಿಯಲ್ ನ್ಯೂರಲ್ ಕ್ರೆಸ್ಟ್ ಸೆಲ್‌ಗಳು (ಸಿಎನ್‌ಸಿಸಿ) ಡಾರ್ಸಲ್ ನ್ಯೂರೋಎಕ್ಟೋಡರ್ಮ್‌ಗೆ ಸ್ಥಳೀಕರಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಎಪಿತೀಲಿಯಲ್-ಮೆಸೆನ್‌ಕೈಮಲ್ ಟ್ರಾನ್ಸಿಶನ್ (ಇಎಮ್‌ಟಿ) 1,2,3 ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ಮೂಲಕ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಶೀಲ ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳ ನ್ಯೂರೋಪಿಥೀಲಿಯಂನಿಂದ ಬೇರ್ಪಡುತ್ತವೆ.ಪ್ರೀಮಿಗ್ರೇಟಿಂಗ್ ಎಪಿತೀಲಿಯಲ್ ಸಿಎನ್‌ಸಿಸಿಗಳು ಇಂಟರ್ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಜಂಕ್ಷನ್‌ಗಳನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಮೊದಲ ಮತ್ತು ಎರಡನೆಯ ಫಾರಂಜಿಲ್ ಕಮಾನುಗಳನ್ನು ತುಂಬುವ ಮತ್ತು ಕ್ರಾನಿಯೊಫೇಶಿಯಲ್ ಕಾರ್ಟಿಲೆಜ್‌ನ ಹೆಚ್ಚಿನ ಭಾಗವನ್ನು ರೂಪಿಸುವ ಮೆಸೆಂಚೈಮಲ್ ಸಿಎನ್‌ಸಿಸಿಗಳಾಗಿ ವಲಸೆ ಹೋಗುತ್ತವೆ.ಹೀಗಾಗಿ, ಸಿಎನ್‌ಸಿಸಿ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವ ಜೀನ್‌ಗಳು ಓರೊಫೇಶಿಯಲ್ ಸೀಳುಗಳಂತಹ ಕ್ರ್ಯಾನಿಯೊಫೇಶಿಯಲ್ ಜನ್ಮಜಾತ ವೈಪರೀತ್ಯಗಳ ಎಟಿಯಾಲಜಿಯಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುತ್ತವೆ, ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ US ನಲ್ಲಿ 1/800 ಜನನಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.ಜನ್ಮಜಾತ ವಿಕಾರಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದು8.
CNCC ಯ ಡಿಲಮಿನೇಷನ್ ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ ಭ್ರೂಣದ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ 8.5 ಮತ್ತು 9.5 ದಿನಗಳ ನಡುವಿನ ಮುಂಭಾಗದ ನರ ಕೊಳವೆಯ ಮುಚ್ಚುವಿಕೆಯೊಂದಿಗೆ ಸೇರಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.ಹಲವಾರು ಮೌಸ್ ಓರೋಫೇಶಿಯಲ್ ಸೀಳು-ಸಂಬಂಧಿತ ಜೀನ್‌ಗಳ ರೂಪಾಂತರಗಳು Irf69,10, Ghrl310, Cfl111, ಮತ್ತು Pdgfrα12 ಸೇರಿದಂತೆ ಕೆಲವು ರೀತಿಯ ನರ ಕೊಳವೆ ದೋಷವನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತವೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ನರ ಕೊಳವೆಯ ಮುಚ್ಚುವಿಕೆ ಮತ್ತು CNCC ಶ್ರೇಣೀಕರಣದ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಸ್ವತಂತ್ರವೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಬಹುದು, ಏಕೆಂದರೆ ಸ್ಪ್ಲಾಚ್ ರೂಪಾಂತರಿತ ಮೌಸ್ (Pax3) CNCC ಶ್ರೇಣೀಕರಣ ಅಥವಾ ವಲಸೆ 13,14 ನಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಪರಿಣಾಮವಿಲ್ಲದೆ ನರ ಕೊಳವೆ ಮುಚ್ಚುವಿಕೆಯಲ್ಲಿ ದೋಷಗಳನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತದೆ.ಸಿಎನ್‌ಸಿಸಿ ಡಿಸೆಕ್ಷನ್ ಮತ್ತು ನ್ಯೂರಲ್ ಟ್ಯೂಬ್ ಮುಚ್ಚುವಿಕೆಯಲ್ಲಿ ದೋಷಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಮೌಸ್ ಮಾದರಿಗಳು ಈ ಎರಡು ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳ ಸಾಮಾನ್ಯ ಆಣ್ವಿಕ ಆಧಾರವನ್ನು ವಿವರಿಸಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
ನ್ಯೂರೋಪಿಥೇಲಿಯಲ್ ಕೋಶಗಳಿಂದ CNCC ಯನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವ ಜಂಕ್ಷನ್‌ಗಳ (AJs) ವಿಸರ್ಜನೆಯ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ, ಅವುಗಳು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತವೆ, ಇತರವುಗಳಲ್ಲಿ, E-ಕ್ಯಾಥರಿನ್, β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್, α-E-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ ಮತ್ತು α-ಆಕ್ಟಿನಿನ್ ಆಕ್ಟಿನ್ ಫಿಲಾಮೆಂಟ್ಸ್ 2 ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿರುತ್ತವೆ. ಅತಿಯಾದ ಒತ್ತಡದ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳಲ್ಲಿನ ಇ-ಕ್ಯಾಥರಿನ್ ಸಿಎನ್‌ಸಿಸಿ ಡಿಲಾಮಿನೇಷನ್‌ನಲ್ಲಿ ಕಡಿತ ಅಥವಾ ವಿಳಂಬವನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ.ಇದಕ್ಕೆ ವಿರುದ್ಧವಾಗಿ, ಇ-ಕ್ಯಾಥರಿನ್‌ನ ನಿಗ್ರಹವು ಆರಂಭಿಕ ಶ್ರೇಣೀಕರಣಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ 15,16.CNCC ಶ್ರೇಣೀಕರಣದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ EMT ಅನ್ನು ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆ ವಹಿಸುವ ಹಲವು ಅಂಶಗಳು ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಅಂಶಗಳಾಗಿವೆ (AP2α, Id2, FOXD3, SNAIL, TWIST, SOX10) ಮತ್ತು ಮ್ಯಾಟ್ರಿಕ್ಸ್ ಮೆಟಾಲೋಪ್ರೊಟೀನೇಸ್‌ಗಳಂತಹ ಎಕ್ಸ್‌ಟ್ರಾಸೆಲ್ಯುಲರ್ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಕ್ಸ್ (ECM) ಮರುರೂಪಿಸುವ ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳು (MMPs), ಆದಾಗ್ಯೂ CNcytoskeles ಗಳು ನೇರವಾಗಿರುತ್ತವೆ ಇನ್ನೂ ತಿಳಿದಿಲ್ಲ.PI3K-AKT ಮಾರ್ಗವು ಇ-ಕ್ಯಾಥರಿನ್ ಮಟ್ಟವನ್ನು ವಿರೋಧಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತಿಳಿದುಬಂದಿದೆ, ಮುಖ್ಯವಾಗಿ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಸಂಶೋಧನೆಯಿಂದ.ಇತ್ತೀಚಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ PDGFα-ಆಧಾರಿತ PI3K-AKT ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್‌ನ ನಷ್ಟವು ಸೀಳು ಅಂಗುಳಿನ ಮತ್ತು ನರ ಕೊಳವೆ ದೋಷಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ ಕ್ರಾನಿಯೊಫೇಶಿಯಲ್ ಅಸಹಜತೆಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, CNCC ಶ್ರೇಣೀಕರಣದ ಮೇಲೆ PI3K-AKT ಮಾರ್ಗ ಮತ್ತು AJ ಸ್ಥಿರತೆಯ ನಡುವಿನ ಸಂಬಂಧವು ಅಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿದೆ.
ಓರೆಯಾದ ಸೀಳು (ObFC) ಅಥವಾ Tessier IV18 ಸೀಳು ಎಂದು ಕರೆಯಲ್ಪಡುವ ಬಾಯಿಯಿಂದ ಕಣ್ಣಿನವರೆಗೆ ವಿಸ್ತರಿಸುವ ತೀವ್ರವಾದ ಸೀಳು ಹೊಂದಿರುವ ಇಬ್ಬರು ಜನರಲ್ಲಿ SPECC1L ಅನ್ನು ಮೊದಲ ರೂಪಾಂತರಿತ ಜೀನ್ ಎಂದು ನಾವು ಹಿಂದೆ ಗುರುತಿಸಿದ್ದೇವೆ.SPECC1L ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಆಟೋಸೋಮಲ್ ಪ್ರಾಬಲ್ಯದ ಒಪಿಟ್ಜ್ G/BBB ಸಿಂಡ್ರೋಮ್ (OMIM #145410) ಹೊಂದಿರುವ ಎರಡು ಬಹುಜನರ ಕುಟುಂಬಗಳಲ್ಲಿ ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದರಲ್ಲಿ ಪೀಡಿತ ವ್ಯಕ್ತಿಗಳು ಹೈಪರ್ ಡಿಸ್ಟೆನ್ಸ್ ಮತ್ತು ಸೀಳು ತುಟಿ/ಅಂಗುಳಿಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿದರು, ಮತ್ತು ಒಂದು ಕುಟುಂಬದಲ್ಲಿ ಟಿಬಿ ಓವರ್‌ಡಿಸ್ಟೆನ್ಸ್ ಸಿಂಡ್ರೋಮ್ (OMI00454050) .ಒಪಿಟ್ಜ್ ಜಿ/ಬಿಬಿಬಿ ಸಿಂಡ್ರೋಮ್‌ನ ಅರ್ಧಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಪ್ರಕರಣಗಳು ಎಕ್ಸ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ (OMIM #300000) ಮತ್ತು MID1 ಜೀನ್‌ನಲ್ಲಿನ ರೂಪಾಂತರಗಳಿಂದ ಉಂಟಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬುಲ್-ಸಂಬಂಧಿತ ಜೀವಕೋಶದ ಅಸ್ಥಿಪಂಜರದ ಪ್ರೋಟೀನ್ 22 ಅನ್ನು ಎನ್ಕೋಡ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ.SPECC1L, ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಆಕ್ಟಿನ್ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್‌ಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಕೂಡ, ಜೀವಕೋಶದ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ ಮತ್ತು ವಲಸೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಆಕ್ಟಿನ್ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್ ಮರುರೂಪಿಸುವಿಕೆಗೆ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್‌ಗೆ ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆ ವಹಿಸಬಹುದು ಎಂದು ನಾವು ಊಹಿಸುತ್ತೇವೆ 18 .ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಮತ್ತು ವಿವೋ ಅಧ್ಯಯನಗಳ ಮೂಲಕ, ನಾವು ಈಗ SPECC1L ಅನ್ನು PI3K-AKT ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಮೂಲಕ AJ ಸ್ಥಿರತೆಯ ಹೊಸ ನಿಯಂತ್ರಕ ಎಂದು ವಿವರಿಸುತ್ತೇವೆ.ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಮಟ್ಟದಲ್ಲಿ, SPECC1L ಕೊರತೆಯು ಪ್ಯಾನ್-ಎಕೆಟಿ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ಮಟ್ಟದಲ್ಲಿ ಇಳಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು ಮತ್ತು ಎಜೆಯ ಅಪಿಕಲ್-ಬೇಸಲ್ ಪ್ರಸರಣದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಳವಾಯಿತು, ಇದು ಎಕೆಟಿ ಮಾರ್ಗದ ರಾಸಾಯನಿಕ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯಿಂದ ಹೊರಹಾಕಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ.ವಿವೊದಲ್ಲಿ, ಸ್ಪೆಕ್11-ಕೊರತೆಯ ಭ್ರೂಣಗಳು ದುರ್ಬಲಗೊಂಡ ನರ ಕೊಳವೆ ಮುಚ್ಚುವಿಕೆಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಸಿಎನ್‌ಸಿಸಿ ಛೇದನವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತವೆ.ಹೀಗಾಗಿ, SPECC1L ಮುಖದ ಮಾರ್ಫೊಜೆನೆಸಿಸ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯ CNCC ಕಾರ್ಯಕ್ಕೆ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಹೆಚ್ಚು ನಿಯಂತ್ರಿತ ಕೋಶ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ ಆಧಾರಿತ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್‌ನಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ.
ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಮಟ್ಟದಲ್ಲಿ SPECC1L ಪಾತ್ರವನ್ನು ನಿರೂಪಿಸಲು, ನಾವು SPECC1L18 ನಲ್ಲಿ ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದ ಸ್ಥಿರವಾದ ಆಸ್ಟಿಯೊಸಾರ್ಕೊಮಾ ಸೆಲ್ ಲೈನ್ U2OS ಕೊರತೆಯನ್ನು ಬಳಸಿದ್ದೇವೆ.SPECC1L (kd) ನಾಕ್‌ಡೌನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಈ ಸ್ಥಿರ U2OS ಕೋಶಗಳು SPECC1L ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಮಟ್ಟದಲ್ಲಿ ಮಧ್ಯಮ (60-70%) ಇಳಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದು, ಜೊತೆಗೆ ಆಕ್ಟಿನ್ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್‌ನ ವಲಸೆ ಮತ್ತು ಮರುಸಂಘಟನೆಯಲ್ಲಿನ ದೋಷಗಳು 18. ಇದಕ್ಕೆ ವಿರುದ್ಧವಾಗಿ, ತೀವ್ರ ಅಸ್ಥಿರ ಇಳಿಕೆ SPECC1L ಮೈಟೊಟಿಕ್ ದೋಷಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ 23 .ಹೆಚ್ಚಿನ ಗುಣಲಕ್ಷಣದ ನಂತರ, ನಮ್ಮ ಸ್ಥಿರವಾದ SPECC1L-kd ಕೋಶಗಳು ಅತ್ಯಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಟ್ಟದ ಸಂಗಮದಲ್ಲಿ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಿದವು ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ (ಚಿತ್ರ 1).ಕಡಿಮೆ ಸಂಗಮದಲ್ಲಿರುವ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು kd ಕೋಶಗಳು ಒಂದೇ ರೀತಿ ಕಾಣುತ್ತವೆ (ಚಿತ್ರ 1A,D).ಸಮ್ಮಿಳನದ ನಂತರ 24 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ, ನಿಯಂತ್ರಣ ಕೋಶಗಳು ತಮ್ಮ ಘನಾಕೃತಿಯ ಆಕಾರವನ್ನು (Fig. 1B, E) ಉಳಿಸಿಕೊಂಡರೆ, SPECC1L-kd ಕೋಶಗಳು ಉದ್ದವಾಗಿರುತ್ತವೆ (Fig. 1C, F).ಜೀವಕೋಶದ ಆಕಾರದಲ್ಲಿನ ಈ ಬದಲಾವಣೆಯ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಣ ಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಕೆಡಿ ಕೋಶಗಳ ವಿವೋ ಲೈವ್ ಇಮೇಜಿಂಗ್‌ನಲ್ಲಿ ಸೆರೆಹಿಡಿಯಲಾಗಿದೆ (ಚಲನಚಿತ್ರ 1).ಸಂಗಮ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ SPECC1L ನ ಪಾತ್ರವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು, ನಾವು ಮೊದಲು ಅದರ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಿದ್ದೇವೆ.ಸಮ್ಮಿಳನದ ಮೇಲೆ SPECC1L ಪ್ರೊಟೀನ್ ಮಟ್ಟಗಳು ಹೆಚ್ಚಿವೆ ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ (ಚಿತ್ರ 1G), ಆದರೆ SPECC1L ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಮಟ್ಟಗಳು ಹೆಚ್ಚಾಗಲಿಲ್ಲ (ಚಿತ್ರ 1H).ಇದರ ಜೊತೆಯಲ್ಲಿ, ಜೀವಕೋಶದ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಹೆಚ್ಚಾದಂತೆ, SPECC1L ಪ್ರೊಟೀನ್ ಇಂಟರ್ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಗಡಿಗಳಲ್ಲಿ (Fig. 2A-E) ಸಂಗ್ರಹಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ, ಇದು ಪೊರೆಯ-ಸಂಬಂಧಿತ β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ (Fig. 2A'-E') ನೊಂದಿಗೆ ಅತಿಕ್ರಮಿಸುವ ಮಾದರಿಯೊಂದಿಗೆ.ಆಕ್ಟಿನ್ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್ 18,23 ನೊಂದಿಗೆ SPECC1L ನ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ನೀಡಿದರೆ SPECC1L ಆಕ್ಟಿನ್-ಆಧಾರಿತ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವ ಜಂಕ್ಷನ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ (AJ) ಸಂವಹನ ನಡೆಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಾವು ಊಹಿಸಿದ್ದೇವೆ.
(AF) SPECC1L ನಾಕ್‌ಡೌನ್ (DF) ಕೋಶಗಳು ನಿಯಂತ್ರಣ U2OS ಕೋಶಗಳಿಗೆ (AC) ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಗಮದಲ್ಲಿ (F) ಉದ್ದವಾಗುತ್ತವೆ.ವಿಭಿನ್ನ ಕೋಶ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಿಗಾಗಿ ನಾವು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಿದ ಆರು ಸಮಯದ ಬಿಂದುಗಳಲ್ಲಿ (T1, T3, T6) ಮೂರು ಇಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.(ಜಿ) SPECC1L ಪ್ರೊಟೀನ್ ನಿಯಂತ್ರಣ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಕಡಿಮೆ ಮಟ್ಟದ ಸಂಗಮಕ್ಕೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಟ್ಟದ ಸಂಗಮದಲ್ಲಿ ಸ್ಥಿರವಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸುವ ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ.SPECC1L ನ ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟ್ ನಿರೀಕ್ಷಿತ 120 kDa ಬ್ಯಾಂಡ್ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕದ ಬ್ಯಾಂಡ್ ಅನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ, ಪ್ರಾಯಶಃ ಅನುವಾದದ ನಂತರ ಮಾರ್ಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ (*).ಕಡಿಮೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಗಮಕ್ಕಾಗಿ ಅದೇ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.SPECC1L ಅನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಗಮದಲ್ಲಿ ತೋರಿಸುವ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಅದೇ ಬ್ಲಾಟ್‌ನಿಂದ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಲಾಗಿದೆ.ಅದೇ ಬ್ಲಾಟ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಯಿತು ಮತ್ತು β-ಆಕ್ಟಿನ್ ಪ್ರತಿಕಾಯದೊಂದಿಗೆ ಮರು-ಪರೀಕ್ಷೆ ಮಾಡಲಾಯಿತು.(H) ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ RT-PCR ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು SPECC1L ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಮಟ್ಟಗಳಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಗಮನಾರ್ಹ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಲಿಲ್ಲ.ದೋಷ ಪಟ್ಟಿಗಳು ನಾಲ್ಕು ಸ್ವತಂತ್ರ ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಂದ SEM ಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತವೆ.
(AE) SPECC1L ನಾಕ್‌ಡೌನ್ (kd) ನೊಂದಿಗೆ U2OS ಸೆಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಸೆಲ್ ಆಕಾರ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಮತ್ತು AJ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯಗೊಳಿಸಲು ಕೋಶ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುವ ಆರು ಸಮಯದ ಅಂಕಗಳನ್ನು (T1-T6) ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ.ಈ ಸಮಯದ ಮೊದಲ ಐದು ಅಂಕಗಳು ಏಕ ಕೋಶಗಳು (T1), 50-70% ಸಣ್ಣ ಕೋಶ ಸಮೂಹಗಳ ಸಮ್ಮಿಳನ (T2), kd ಕೋಶಗಳನ್ನು ಮರುರೂಪಿಸದೆಯೇ ಸಮ್ಮಿಳನ (T3), kd ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಮರುರೂಪಿಸುವುದು (T4), ಮತ್ತು 24 ಗಂಟೆಗಳ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿವೆ.kd (T5) ಕೋಶಗಳ ಹಿಂಭಾಗದ ರೂಪದಲ್ಲಿ.SPECC1L ಪ್ರೊಟೀನ್ ಮುಖ್ಯವಾಗಿ T1 (A) ನಲ್ಲಿ ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸಂನಲ್ಲಿ ಹರಡಿತು, ಆದರೆ ಅದರ ಶೇಖರಣೆಯನ್ನು ನಂತರದ ಸಮಯದ ಬಿಂದುಗಳಲ್ಲಿ (B-E, ಬಾಣಗಳು) ಅಂತರಕೋಶದ ಗಡಿಗಳಲ್ಲಿ ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ.(FJ) β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ ಎಜೆ ಕಾಂಪ್ಲೆಕ್ಸ್‌ಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಇಂಟರ್ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಗಡಿಗಳಲ್ಲಿ ಇದೇ ರೀತಿಯ ಶೇಖರಣೆಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.(A'-E') SPECC1L ಮತ್ತು β-catenin ಹೆಚ್ಚಿನ ಕೋಶ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ (ಬಾಣಗಳು) ಜೀವಕೋಶದ ಗಡಿಗಳಲ್ಲಿ ಅತಿಕ್ರಮಿಸುವ ಕಲೆಗಳನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ.(F'-J') SPECC1L-kd ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ, β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ ಕಲೆಯು ಕಡಿಮೆ ಕೋಶ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ (F'-H') ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಕಂಡುಬರುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಜೀವಕೋಶದ ಆಕಾರವು ಬದಲಾದಾಗ (I', J'; ಬಾಣಗಳು) ವಿಸ್ತರಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು AJ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ ಬದಲಾಗಿದ್ದಾರೆ.ಬಾರ್ಗಳು = 10 µm.
ನಾವು ನಂತರ AJ ಮೇಲೆ SPECC1L ಕೊರತೆಯ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿದ್ದೇವೆ.ಎಫ್-ಆಕ್ಟಿನ್, ಮೈಯೋಸಿನ್ IIb, β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ ಮತ್ತು ಇ-ಕ್ಯಾಥರಿನ್24,25,26,27 ಸೇರಿದಂತೆ ಅಂಗೀಕೃತ ಘಟಕಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ ನಾವು ಹಲವಾರು AJ-ಸಂಬಂಧಿತ ಮಾರ್ಕರ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿದ್ದೇವೆ.ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ SPECC1L-kd ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಆಕ್ಟಿನ್ ಒತ್ತಡದ ಫೈಬರ್‌ಗಳು ಹೆಚ್ಚಾದವು (Fig. 3A,B) 18 .ಆಕ್ಟಿನ್ ಫಿಲಾಮೆಂಟ್ಸ್‌ಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ Myosin IIb ವಿಟ್ರೊದಲ್ಲಿ SPECC1L-kd ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಇದೇ ರೀತಿಯ ಹೆಚ್ಚಳವನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ (Fig. 3C,D).AJ-ಸಂಬಂಧಿತ β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ ಜೀವಕೋಶ ಪೊರೆಯಲ್ಲಿ ಕ್ಯಾಥರಿನ್‌ಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ, ನಿಯಂತ್ರಣ ಕ್ಯೂಬೊಸೈಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯ "ಜೇನುಗೂಡು" ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಾದರಿಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ (Fig. 3E,G).ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಮತಟ್ಟಾದ ಚಿತ್ರಗಳಲ್ಲಿ, β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ (Fig. 3E,F) ಮತ್ತು E-ಕ್ಯಾಥರಿನ್ (Fig. 3G,H) ಸಂಗಮ SPECC1L-ಕೊರತೆಯ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಕೋಶ ಪೊರೆಯ ಮೇಲೆ ಕಲೆಗಳು ವಿಸ್ತೃತ ಬಣ್ಣಗಳ ಪ್ರಮುಖ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಿದವು.Kd ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ AJ-ಸಂಯೋಜಿತ β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ ಕಲೆಯ ಈ ವಿಸ್ತರಣೆಯು ಸಂಗಮದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ಉಚ್ಚರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಜೀವಕೋಶದ ಆಕಾರದಲ್ಲಿನ ಬದಲಾವಣೆಗಳಿಗೆ ಮುಂಚಿತವಾಗಿ ಕಾಣಿಸಿಕೊಂಡಿತು (Fig. 2F-J, F'-J').ಈ ವಿಸ್ತೃತ AJ ಸ್ಟೈನಿಂಗ್‌ನ ಭೌತಿಕ ಸ್ವರೂಪವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು, ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಮಿಷನ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (TEM) ಮೂಲಕ SPECC1L-kd U2OS ಕೋಶಗಳ ಅಪಿಕಲ್-ಬೇಸಲ್ ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶದ ಗಡಿಗಳನ್ನು ನಾವು ಪರಿಶೀಲಿಸಿದ್ದೇವೆ (ಚಿತ್ರ 3I,J).AJ (ಬಾಣಗಳು) ಸೂಚಿಸುವ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ದಟ್ಟವಾದ ಪ್ರದೇಶಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ನಿಯಂತ್ರಣ ಕೋಶಗಳಿಗೆ (Fig. 3I) ವಿರುದ್ಧವಾಗಿ, kd ಜೀವಕೋಶಗಳು (Fig. 3J) ಅಪಿಕೋಬಾಸಲ್ ಪ್ಲೇನ್ ಉದ್ದಕ್ಕೂ AJ ಯ ಹೆಚ್ಚಿನ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ದೊಡ್ಡ, ಪಕ್ಕದ ಪ್ರದೇಶಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ..ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ಅಡ್ಡ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ, ನಾವು kd ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ವ್ಯಾಪಕವಾದ ಜೀವಕೋಶ ಪೊರೆಯ ಮಡಿಕೆಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ (Fig. S1A,B), ಇದು β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ ಮತ್ತು ಇ-ಕ್ಯಾಥರಿನ್ ಸ್ಟೈನಿಂಗ್ ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳ ವಿಸ್ತೃತ ಮಾದರಿಯನ್ನು ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ (Fig. 3F,H).AJ ಗಳಲ್ಲಿ SPECC1L ಪಾತ್ರವನ್ನು ಬೆಂಬಲಿಸಲು, β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ ಅನ್ನು SPECC1L ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಗಮ U2OS ಕೋಶಗಳ ಲೈಸೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ (Fig. 3K) ಸಹ-ಇಮ್ಯುನೊಪ್ರೆಸಿಪಿಟೇಟ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.AJ ಮಾರ್ಕರ್‌ಗಳಿಗೆ ವಿಸ್ತೃತ ಇಮ್ಯುನೊಸ್ಟೈನಿಂಗ್ ಜೊತೆಗೆ, SPECC1L ಕೊರತೆಯು AJ ಅಪಿಕಲ್-ಬೇಸಲ್ ಸಾಂದ್ರತೆ ಮತ್ತು ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಎಂಬ ನಮ್ಮ ಊಹೆಯೊಂದಿಗೆ TEM ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಸ್ಥಿರವಾಗಿದೆ.
(AH) 48 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರದ ಸಮ್ಮಿಳನದಲ್ಲಿ (T6; A, B) ಕೆಡಿ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿದ ಎಫ್-ಆಕ್ಟಿನ್ ಕಲೆಗಳು.ಎಫ್-ಆಕ್ಟಿನ್ (C, D) ಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಮೈಯೋಸಿನ್ IIb ನ ಬದಲಾದ ಕಲೆಗಳು.ನಿಯಂತ್ರಣ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ (ಇ, ಜಿ) β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ ಮತ್ತು ಇ-ಕ್ಯಾಥರಿನ್ ಮೆಂಬರೇನ್ ಸ್ಟೈನಿಂಗ್ ನ ನಯವಾದ ಮಾದರಿಯನ್ನು SPECC1L-kd (F, H) ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ವರ್ಧಿಸಲಾಗಿದೆ.ಬಾರ್‌ಗಳು = 10 µm.(I-J) ಅಪಿಕಲ್-ಬೇಸಲ್ ಇಂಟರ್ ಸೆಲ್ಯುಲರ್ ಜಂಕ್ಷನ್ ಅನ್ನು ಗಮನಿಸುವ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಗ್ರಾಫ್‌ಗಳು.ನಿಯಂತ್ರಣ ಕೋಶಗಳು ಜಿಗುಟಾದ ಜಂಕ್ಷನ್‌ಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುವ ವಿಭಿನ್ನ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್-ದಟ್ಟವಾದ ಪ್ರದೇಶಗಳನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ (I, ಬಾಣಗಳು).ಇದಕ್ಕೆ ವಿರುದ್ಧವಾಗಿ, SPECC1L-kd ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಸಂಪೂರ್ಣ ಅಪಿಕಲ್-ಬೇಸಲ್ ಜಂಕ್ಷನ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ದಟ್ಟವಾಗಿ (J, ಬಾಣಗಳು) ಕಾಣಿಸಿಕೊಂಡಿತು, ಇದು ಹೆಚ್ಚಿದ ಸಾಂದ್ರತೆ ಮತ್ತು ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವ ಜಂಕ್ಷನ್‌ಗಳ ಪ್ರಸರಣವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.(ಕೆ) ಸಂಗಮ U2OS ಸೆಲ್ ಲೈಸೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ SPECC1L ನೊಂದಿಗೆ β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ ಸಹ-ಇಮ್ಯುನೊಪ್ರೆಸಿಪಿಟೇಟ್ ಆಗಿದೆ.ನಾಲ್ಕು ಸ್ವತಂತ್ರ ಪ್ರಯೋಗಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುವ ಒಂದು ಸ್ಥಳದಿಂದ ತೆಗೆದ ಚಿತ್ರ.
ಕ್ರಾನಿಯೊಫೇಸಿಯಲ್ ಮಾರ್ಫೋಜೆನೆಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ SPECC1L ಪಾತ್ರವನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು, ನಾವು ಎರಡು ಸ್ವತಂತ್ರ ES ಟ್ರ್ಯಾಪ್ ಸೆಲ್ ಲೈನ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು Specc1l ಕೊರತೆಯ ಮೌಸ್ ಮಾದರಿಯನ್ನು ರಚಿಸಿದ್ದೇವೆ, DTM096 ಮತ್ತು RRH048 (BayGenomics, CA), ಇದು ಇಂಟ್ರಾನ್ 1 ಮತ್ತು Specc1l ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತದೆ (ಚಿತ್ರ 115 ರಲ್ಲಿ ಸೆರೆಹಿಡಿಯಲಾಗಿದೆ) .4A, ಚಿತ್ರ S2).ಡಿಕೋಯ್ ವೆಕ್ಟರ್ ಇನ್ಸರ್ಟ್ನ ಜೀನೋಮಿಕ್ ಸ್ಥಳವನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣ ಜೀನೋಮ್ ಅನುಕ್ರಮದಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು PCR (Fig. S2) ನಿಂದ ದೃಢೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ.ಎರಡೂ ಜೀನ್ ಟ್ರ್ಯಾಪ್ ವಿನ್ಯಾಸಗಳು ಸೆರೆಹಿಡಿಯಲ್ಪಟ್ಟ ನಂತರ Specc11-lacZ ವರದಿಗಾರರ ಚೌಕಟ್ಟಿನಲ್ಲಿ ಸಮ್ಮಿಳನಕ್ಕೆ ಅವಕಾಶ ಮಾಡಿಕೊಟ್ಟವು.ಆದ್ದರಿಂದ, X-gal ಸ್ಟೈನಿಂಗ್ ಮೂಲಕ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾದ lacZ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು Specc11 ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯ ಸೂಚಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ.ಎರಡೂ ಆಲೀಲ್‌ಗಳು ಒಂದೇ ರೀತಿಯ ಲ್ಯಾಕ್‌ಝಡ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಿದವು, ಇಂಟ್ರಾನ್ 1 ರಲ್ಲಿನ DTM096 ಜೀನ್ ಟ್ರ್ಯಾಪ್ ಇಂಟ್ರಾನ್ 15 ರಲ್ಲಿ RRH048 ಗಿಂತ ಪ್ರಬಲವಾದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ (ತೋರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ).ಆದಾಗ್ಯೂ, E8.5 (ಚಿತ್ರ 4B), ನರ ಕೊಳವೆ ಮತ್ತು E9.5 ಮತ್ತು E10.5 (ಚಿತ್ರ 4C,D) ನಲ್ಲಿ ಮುಖದ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳಲ್ಲಿ (ಚಿತ್ರ 4C,D) ಮತ್ತು ಅಂಗಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸುವಲ್ಲಿ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಬಲವಾದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯೊಂದಿಗೆ Specc1l ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. E10 ನಲ್ಲಿ.5 ಮತ್ತು ಕಣ್ಣುಗಳು (ಚಿತ್ರ 4D).E10.5 ನಲ್ಲಿನ ಮೊದಲ ಗಂಟಲಿನ ಕಮಾನಿನಲ್ಲಿ SPECC1L ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯು CNCC ವಂಶಾವಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಎಪಿಥೀಲಿಯಂ ಮತ್ತು ಆಧಾರವಾಗಿರುವ ಮೆಸೆನ್‌ಕೈಮ್18 ನಲ್ಲಿದೆ ಎಂದು ನಾವು ಹಿಂದೆ ವರದಿ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ.CNCC ಯಲ್ಲಿ SPECC1L ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು, ನಾವು E8.5 ನರ ಮಡಿಕೆಗಳನ್ನು (ಚಿತ್ರ 4E-J) ಮತ್ತು E9.5 ತಲೆಬುರುಡೆ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು (ಚಿತ್ರ 4K-) ನಿರ್ವಹಿಸಿದ್ದೇವೆ.E8.5 ನಲ್ಲಿ, SPECC1L ಸ್ಟೇನ್ಡ್ ನ್ಯೂರಲ್ ಫೋಲ್ಡ್‌ಗಳನ್ನು ತೀವ್ರವಾಗಿ (Fig. 4E, H), NCC ಮಾರ್ಕರ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ (Fig. 4G, J) ಬಣ್ಣಿಸಿದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ.E9.5 ನಲ್ಲಿ, SPECC1L (Fig. 4K, N) AP2A (Fig. 4L, M) ಅಥವಾ SOX10 (Fig. 4O, P) ನೊಂದಿಗೆ ಸಿಎನ್‌ಸಿಸಿ ಸಹ-ಸ್ಟೇನ್ಡ್ ಮೈಗ್ರೇಟಿಂಗ್ ಸಿಎನ್‌ಸಿಸಿ ಬಲವಾಗಿ ಬಣ್ಣ ಹೊಂದಿದೆ.
(A) ES DTM096 (ಇಂಟ್ರಾನ್ 1) ಮತ್ತು RRH048 (ಇಂಟ್ರಾನ್ 15) ಸೆಲ್ ಕ್ಲೋನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಡಿಕೋಯ್ ವೆಕ್ಟರ್ ಅಳವಡಿಕೆಯನ್ನು ತೋರಿಸುವ ಮೌಸ್ ಸ್ಪೆಕ್11 ಜೀನ್‌ನ ಸ್ಕೀಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಪ್ರಾತಿನಿಧ್ಯ.(BD) E8.5 ರಿಂದ E10.5 ವರೆಗಿನ Specc1l ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುವ ಹೆಟೆರೋಜೈಗಸ್ Specc1lDTM096 ಭ್ರೂಣಗಳ ಲ್ಯಾಕ್‌ಝಡ್ ಸ್ಟೇನಿಂಗ್.NE = neuroectoderm, NF = ನರಗಳ ಪಟ್ಟು, PA1 = ಮೊದಲ ಗಂಟಲಕುಳಿ ಕಮಾನು.(EP) E8.5 (NF; EJ) ನರ ಮಡಿಕೆಗಳು ಮತ್ತು E9.5 (KP) ತಲೆಬುರುಡೆ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ NCC ಮಾರ್ಕರ್‌ಗಳಾದ AP2A ಮತ್ತು SOX10 ಜೊತೆಗೆ SPECC1L ಇಮ್ಯುನೊಸ್ಟೈನಿಂಗ್.AP2A (F, G; ಬಾಣದ ಹೆಡ್‌ಗಳು) ಮತ್ತು SOX10 (I, J; ಬಾಣದ ಹೆಡ್‌ಗಳು) ನೊಂದಿಗೆ ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ, E8.5 (E, H; ಬಾಣದ ಹೆಡ್‌ಗಳು) ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ SPECC1L ಸ್ಟೆನಿಂಗ್ ಅನ್ನು ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ.E9.5 ನಲ್ಲಿ, SPECC1L AP2A (L, M; ಬಾಣಗಳು) ಮತ್ತು SOX10 (O, P; ಬಾಣಗಳು) ಎಂದು ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ವಲಸೆ CNCC ಗಳು (K, N; ಬಾಣಗಳು) ಬಲವಾಗಿ ಬಣ್ಣಬಣ್ಣದವು.
ಹೆಟೆರೋಜೈಗಸ್ Specc1lDTM096/+ ಮತ್ತು Specc1lRRH048/+ ಇಲಿಗಳ ನಡುವಿನ ದಾಟುವಿಕೆಯು ಎರಡು ಜೀನ್ ಟ್ರ್ಯಾಪ್ ಆಲೀಲ್‌ಗಳು ಪೂರಕವಾಗಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಜೀನ್ ಟ್ರ್ಯಾಪ್ ಆಲೀಲ್‌ಗೆ ಸಂಯುಕ್ತ ಹೆಟೆರೋಜೈಗೋಟ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಭ್ರೂಣದ ಹೋಮೋಜೈಗೋಟ್‌ಗಳು ಭ್ರೂಣದ ಮಾರಕವಾಗಿದೆ (ಟೇಬಲ್ S1).ಮೆಂಡೆಲಿಯನ್ ಅನುಪಾತಗಳು ಹುಟ್ಟಿನಲ್ಲಿ ಹೆಟೆರೋಜೈಗೋಟ್‌ಗಳ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯ ದರದಲ್ಲಿ ಇಳಿಕೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ (ನಿರೀಕ್ಷಿತ 1.34 ವಿರುದ್ಧ 2.0).ಹೆಟೆರೋಜೈಗೋಟ್‌ಗಳ ನಡುವೆ ಕಡಿಮೆ ಪೆರಿನಾಟಲ್ ಮರಣವನ್ನು ನಾವು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ, ಕೆಲವು ಕ್ರ್ಯಾನಿಯೊಫೇಶಿಯಲ್ ವೈಪರೀತ್ಯಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದವು (Fig. S3).ಆದಾಗ್ಯೂ, ಈ ಪೆರಿನಾಟಲ್ ಕ್ರಾನಿಯೊಫೇಶಿಯಲ್ ಫಿನೋಟೈಪ್‌ಗಳ ಕಡಿಮೆ ನುಗ್ಗುವಿಕೆಯು ಅವುಗಳ ಆಧಾರವಾಗಿರುವ ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಕಷ್ಟಕರವಾಗಿಸುತ್ತದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ನಾವು ಹೋಮೋಜೈಗಸ್ ಸ್ಪೆಕ್11 ಮ್ಯಟೆಂಟ್‌ಗಳ ಭ್ರೂಣದ ಮಾರಕ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಮೇಲೆ ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸಿದ್ದೇವೆ.
E9.5-10.5 (Fig. 5A-D) ನಂತರ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಯುಕ್ತ ಹೆಟೆರೋಜೈಗಸ್ ಅಥವಾ ಹೋಮೋಜೈಗಸ್ Specc1lDTM096/RRH048 ರೂಪಾಂತರಿತ ಭ್ರೂಣಗಳು ಬೆಳವಣಿಗೆಯಾಗಲಿಲ್ಲ, ಮತ್ತು ನರ ಕೊಳವೆಯು ಮುಂಭಾಗದಲ್ಲಿ ಮುಚ್ಚುವುದಿಲ್ಲ (Fig. 5B, D) ಮತ್ತು ಕೆಲವೊಮ್ಮೆ ಮುಚ್ಚಿದ ಹಿಂಭಾಗದಲ್ಲಿ (ತೋರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ) ..ಈ ತಲೆಬುರುಡೆಯ ನರ ಕೊಳವೆಯ ಮುಚ್ಚುವಿಕೆಯ ದೋಷವು E10.5 ನಲ್ಲಿ ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ ಉಳಿದಿರುವ DLX2 ಎಂದು ಗುರುತಿಸಲಾದ CNCC ಯ ಬಹುಪಾಲು ಜೊತೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ, ಇದು ಯಾವುದೇ ಛೇದನವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ (ಚಿತ್ರ 5A'-D').CNCC ಯ ಒಟ್ಟಾರೆ ಗಾತ್ರವನ್ನು ಸಹ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲಾಗಿದೆಯೇ ಎಂದು ನಿರ್ಧರಿಸಲು, ನಾವು Wnt1-Cre ಮತ್ತು ROSAmTmG ಯೊಂದಿಗೆ ನಮ್ಮ ಜೀನ್ ಟ್ರ್ಯಾಪ್ ಲೈನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ GFP ಯೊಂದಿಗೆ CNCC ಲೈನ್‌ಗಳನ್ನು ಟ್ಯಾಗ್ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ.ನಾವು ಸಂಪೂರ್ಣ ಭ್ರೂಣಗಳಿಂದ ವಿಂಗಡಿಸಲಾದ GFP+ NCC ಮತ್ತು GFP- (RFP+) NCC ಅಲ್ಲದ ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಮಾಡುತ್ತೇವೆ.E9.5 ನಲ್ಲಿ, ಫ್ಲೋ-ವಿಂಗಡಿಸಿದ GFP-ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಿದ CNCC ಗಳ ಪ್ರಮಾಣವು WT ಮತ್ತು ರೂಪಾಂತರಿತ ಭ್ರೂಣಗಳ ನಡುವೆ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಬದಲಾಗಲಿಲ್ಲ (ತೋರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ), ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯ CNCC ವಿವರಣೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, SPECC1L-kd ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವಂತೆ, ದೋಷಯುಕ್ತ CNCC ಲೇಯರಿಂಗ್‌ನಿಂದಾಗಿ, ಪ್ರಾಯಶಃ ಹೆಚ್ಚಿದ ಸಾಂದ್ರತೆ ಅಥವಾ AJ ಕೋಶಗಳ ಪ್ರಸರಣದಿಂದಾಗಿ ಬಹಿರಂಗಗೊಂಡ ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ (ಚಿತ್ರ 5B') ಉಳಿದಿರುವ Wnt1-Cre ಮತ್ತು DLX2 ಕಲೆಗಳು ಎಂದು ನಾವು ಊಹಿಸಿದ್ದೇವೆ.ನರಗಳ ಪದರದಲ್ಲಿ CNCC ಇರುವಿಕೆಯನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಲು ನಾವು NCC ಮಾರ್ಕರ್‌ಗಳಾದ SOX10, AP2A ಮತ್ತು DLX2 ಅನ್ನು ಬಳಸಿದ್ದೇವೆ (ಚಿತ್ರ 5E-R).E8.5 ನಲ್ಲಿ, WT (Fig. 5E, G, I) ಮತ್ತು Specc1l ರೂಪಾಂತರಿತ (Fig. 5F, H, J) ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ ಎಲ್ಲಾ ಮೂರು NCC ಮಾರ್ಕರ್‌ಗಳಿಗೆ ನರಗಳ ಪದರದ ಕಲೆಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ.E9.5 ನಲ್ಲಿ, NCC ಮಾರ್ಕರ್‌ಗಳು WT ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ (Fig. 5M, O, Q) ವಲಸೆ ಹೋಗುವ NCC ಅನ್ನು ಬಣ್ಣಿಸಿದರೆ, Specc1l ರೂಪಾಂತರಿತ ಭ್ರೂಣಗಳ (Fig. 5N, P, R) ಬಹಿರಂಗವಾದ ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ ಉಳಿದ NCC ಕಲೆಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ.ಏಕೆಂದರೆ SOX10 ಮತ್ತು DLX2 CNCC ಗಳನ್ನು ವಲಸೆ ಹೋಗುವುದನ್ನು ಗುರುತಿಸುತ್ತದೆ, ಈ ಫಲಿತಾಂಶವು SPECC1L-ಕೊರತೆಯ CNCC ಗಳು ವಲಸೆಯ ನಂತರದ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಸಾಧಿಸುತ್ತವೆ ಆದರೆ ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳಿಂದ ವಲಸೆ ಹೋಗಲು ವಿಫಲವಾಗುತ್ತವೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ಸ್ಪೆಕ್ 11 ಕೊರತೆಯು ನ್ಯೂರಲ್ ಟ್ಯೂಬ್ ಮುಚ್ಚುವಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ, ಕಪಾಲದ ನರ ಕ್ರೆಸ್ಟ್ ಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಎಜೆಗಳ ಡಿಲಾಮಿನೇಷನ್.
(A, B') E9.5 WT (A) Wnt1-Cre (A') ನೊಂದಿಗೆ ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ಕ್ರೇನಿಯಲ್ ನ್ಯೂರಲ್ ಕ್ರೆಸ್ಟ್ ಸೆಲ್‌ಗಳನ್ನು (CNCC) ಸಾಗಿಸುವ ಭ್ರೂಣ.ಇದಕ್ಕೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿ, ಸ್ಪೆಕ್11 ರೂಪಾಂತರಿತ ಭ್ರೂಣಗಳು ತೆರೆದ ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳನ್ನು (ಬಿ), ಬಾಣದ ಹೆಡ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಸಿಎನ್‌ಸಿಸಿಗಳು ವಲಸೆ ಹೋಗದ (ಬಿ', ಬಾಣದ ಹೆಡ್‌ಗಳು) ತೋರಿಸುತ್ತವೆ.(C, D') ಬ್ರೈಟ್ ಫೀಲ್ಡ್ ಚಿತ್ರಗಳು (C, D') ಮತ್ತು ಇಮ್ಯುನೊಸ್ಟೈನಿಂಗ್ (C', D') CNCC ಮಾರ್ಕರ್ DLX2 ಆಫ್ E10.5 WT ಭ್ರೂಣಗಳು (C, C') ಮತ್ತು Specc1l (D, D').WT E10.5 ಭ್ರೂಣಗಳಲ್ಲಿ, DLX2-ಧನಾತ್ಮಕ CNCC ಗಿಲ್ ಕಮಾನುಗಳನ್ನು (C', ಬಾಣಗಳು) ವಸಾಹತುವನ್ನಾಗಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಮ್ಯಟೆಂಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ, ತೆರೆದ ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ (D', ಬಾಣಗಳು) ಮತ್ತು ಮೊದಲ ಗಂಟಲಿನ ಕಮಾನುಗಳಲ್ಲಿ (D',) ಎದ್ದುಕಾಣುವ ಕಲೆಗಳು ಇರುತ್ತವೆ. ಬಾಣಗಳು).) ಕೆಲವು ಕಲೆಗಳೊಂದಿಗೆ (ಬಾಣಗಳು) ಕಳಪೆ ಡಿಲಾಮಿನೇಷನ್ ಮತ್ತು CNCC ಯ ವಲಸೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.ER) E8.5 (E-L) ಮತ್ತು E9.5 (M-R) ಹಂತಗಳಲ್ಲಿ WT ಮತ್ತು Specc1l ರೂಪಾಂತರಿತ ಭ್ರೂಣಗಳ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು NCC ಮಾರ್ಕರ್‌ಗಳು SOX10 (E, F, M, N), AP2A (G, H,) ನೊಂದಿಗೆ ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. O, P ) ಮತ್ತು DLX2 (I, J, Q, R).E8.5 ನಲ್ಲಿ, ವೈಲ್ಡ್-ಟೈಪ್ ನ್ಯೂರಲ್ ಫೋಲ್ಡ್ (NF) ಮತ್ತು ರೂಪಾಂತರಿತ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ NCC ಕಲೆಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು.E8.5 WT (K) ಮತ್ತು ಮ್ಯುಟೆಂಟ್ (L) ನಲ್ಲಿ SOX10 ಮತ್ತು β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್‌ನ ಸಹ-ಸ್ಟೇನಿಂಗ್ ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳಲ್ಲಿನ ಜೀವಕೋಶದ ಗಡಿಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿದ β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ ಕಲೆಗಳನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿತು.E9.5 ನಲ್ಲಿ, ವಲಸೆ ಹೋಗುವ CNCC ಗಳ (M, O, Q) ವೈಲ್ಡ್-ಟೈಪ್ ಸ್ಟೆನಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು, ಆದರೆ ರೂಪಾಂತರಿತ ವ್ಯಕ್ತಿಗಳಲ್ಲಿ, ಶ್ರೇಣೀಕರಿಸದ CNCC ಗಳು ತೆರೆದ ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳನ್ನು (N, P, R) ಬಣ್ಣಿಸುತ್ತವೆ.(S-Z) E9.5 ರೂಪಾಂತರದೊಂದಿಗೆ WT ಮತ್ತು Specc11DTM096/RRH048 ಭ್ರೂಣಗಳ ಕರೋನಲ್ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ vivo AJ ಲೇಬಲಿಂಗ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಲ್ಲಿ.ಮೇಲಿನ ಬಲ ಮೂಲೆಯಲ್ಲಿ ಅಂದಾಜು ವಿಭಾಗೀಯ ಸಮತಲವನ್ನು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.ರೂಪಾಂತರಿತ ಅಂಗಾಂಶಗಳ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ, ಎಫ್-ಆಕ್ಟಿನ್ (ಎಸ್, ಟಿ) ಮತ್ತು ಮೈಯೋಸಿನ್ IIb (ಯು, ವಿ) ಹೆಚ್ಚಿದ ಕಲೆಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ.ಅಂಜೂರ 3 ರಲ್ಲಿನ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಫಲಿತಾಂಶಗಳಂತೆಯೇ, ರೂಪಾಂತರಿತ ಭ್ರೂಣಗಳಲ್ಲಿ, β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ (W, X) ಮತ್ತು ಇ-ಕ್ಯಾಥರಿನ್ (Y, Z) ಗಾಗಿ ವರ್ಧಿತ ಮೆಂಬರೇನ್ ಸ್ಟೆನಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ.(AA-BB) ಅಪಿಕಲ್-ಬೇಸಲ್ ಕೋಶದ ಗಡಿಯಿಂದ ಆಚೆಗೆ ಕಾಣುವ ಕಾಡು-ಮಾದರಿಯ ಭ್ರೂಣದ ಒಂದು ವಿಭಾಗದ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಗ್ರಾಫ್ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವ ಜಂಕ್ಷನ್‌ಗಳನ್ನು (AA, ಬಾಣಗಳು) ಸೂಚಿಸುವ ವಿಶಿಷ್ಟ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್-ದಟ್ಟ ಪ್ರದೇಶವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.ಇದಕ್ಕೆ ವಿರುದ್ಧವಾಗಿ, Specc11 ರೂಪಾಂತರಿತ ಭ್ರೂಣಗಳ (BB, ಬಾಣಗಳು) ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ, ಸಂಪೂರ್ಣ ಅಪಿಕೋಬಾಸಲ್ ಜಂಕ್ಷನ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ದಟ್ಟವಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಇದು ಹೆಚ್ಚಿದ ಸಾಂದ್ರತೆ ಮತ್ತು ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವ ಜಂಕ್ಷನ್‌ಗಳ ಪ್ರಸರಣವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ಬದಲಾದ AJ ಯ ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಲೇಯರಿಂಗ್ ಆಗಿದೆ ಎಂಬ ನಮ್ಮ ಊಹೆಯನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು, ನಾವು Specc1l ರೂಪಾಂತರಿತ ಭ್ರೂಣಗಳ (Fig. 5S-Z) ಬಹಿರಂಗ ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ AJ ಲೇಬಲಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಿದ್ದೇವೆ.ನಾವು ಆಕ್ಟಿನ್ ಸ್ಟ್ರೆಸ್ ಫೈಬರ್‌ಗಳಲ್ಲಿ (Fig. 5S, T) ಹೆಚ್ಚಳವನ್ನು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಆಕ್ಟಿನ್ ಫೈಬರ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ myosin IIB ಸ್ಟೆನಿಂಗ್‌ನ (Fig. 5U, V) ಸಹವರ್ತಿ ಹೆಚ್ಚಿದ ಸ್ಥಳೀಕರಣವನ್ನು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ.ಮುಖ್ಯವಾಗಿ, ಇಂಟರ್ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಗಡಿಗಳಲ್ಲಿ β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ (Fig. 5W,X) ಮತ್ತು E-ಕ್ಯಾಥರಿನ್ (Fig. 5Y,Z) ಹೆಚ್ಚಿದ ಕಲೆಗಳನ್ನು ನಾವು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ.E8.5 ಭ್ರೂಣಗಳ (Fig. 5K, L) ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ NCC ಯ β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ ಸ್ಟೈನಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಸಹ ನಾವು ಪರಿಶೀಲಿಸಿದ್ದೇವೆ.β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ ಬಣ್ಣವು Specc1l ರೂಪಾಂತರಿತ ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ (Fig. 5L ಮತ್ತು K) ಪ್ರಬಲವಾಗಿ ಕಂಡುಬಂದಿದೆ, ಇದು AJ ಬದಲಾವಣೆಗಳು ಪ್ರಾರಂಭವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.E9.5 ಭ್ರೂಣಗಳ ತಲೆಬುರುಡೆಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಗ್ರಾಫ್‌ಗಳಲ್ಲಿ, WT (Fig. 5AA, BB ಮತ್ತು S1E-H) ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ Specc1l ರೂಪಾಂತರಿತ ಭ್ರೂಣಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿದ ಪ್ರಸರಣ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್-ದಟ್ಟವಾದ ಕಲೆಗಳನ್ನು ನಾವು ಮತ್ತೊಮ್ಮೆ ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ.ಒಟ್ಟಾಗಿ ತೆಗೆದುಕೊಂಡರೆ, ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು SPECC1L-kd U2OS ಸೆಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿನ ನಮ್ಮ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಬೆಂಬಲಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ನಮ್ಮ ರೂಪಾಂತರಿತ ಭ್ರೂಣಗಳಲ್ಲಿ ಅಸಹಜವಾದ AJ ಸ್ಟೈನಿಂಗ್ CNCC ಶ್ರೇಣೀಕರಣಕ್ಕೆ ಮುಂಚಿತವಾಗಿರುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
AKT ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು E-ಕ್ಯಾಥರಿನ್ ಸ್ಥಿರತೆಯ ನಡುವೆ ತಿಳಿದಿರುವ ವಿರೋಧಾತ್ಮಕ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ನೀಡಲಾಗಿದೆ, 17,28 ನಾವು PI3K-AKT ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್‌ನ ಒಳಗೊಳ್ಳುವಿಕೆಯನ್ನು ಊಹಿಸಿದ್ದೇವೆ.ಜೊತೆಗೆ, ನಾವು E9.5-10.5 ನಲ್ಲಿ ಮಾರಣಾಂತಿಕವಾಗಿ (<5%) ಪಾರಾದ ನಮ್ಮ ಕೆಲವು ರೂಪಾಂತರಿತ ಭ್ರೂಣಗಳಲ್ಲಿ ಸಬ್‌ಪಿಡರ್ಮಲ್ ಗುಳ್ಳೆಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಬದಲಿಗೆ E13.5 (Fig. S3) ನಲ್ಲಿ ನೆಲೆಸಿದ್ದೇವೆ.ಸಬ್‌ಪಿಡರ್ಮಲ್ ಕೋಶಕಗಳು PDGFRα12 ಆಧರಿಸಿ ಕಡಿಮೆಯಾದ PI3K-AKT ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್‌ನ ವಿಶಿಷ್ಟ ಲಕ್ಷಣವಾಗಿದೆ.ಫ್ಯಾಂಟೌಝೋ ಮತ್ತು ಇತರರು.(2014) PdgfraPI3K/PI3K ರೂಪಾಂತರಿತ ಭ್ರೂಣಗಳಲ್ಲಿ PDGFRα-ಆಧಾರಿತ PI3K ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ ಅಡ್ಡಿಯು ಸಬ್‌ಪಿಡರ್ಮಲ್ ಕೋಶಕಗಳು, ನರ ಕೊಳವೆಯ ದೋಷಗಳು ಮತ್ತು ಸೀಳು ಅಂಗುಳಿನ ಫಿನೋಟೈಪ್‌ಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ವರದಿ ಮಾಡಿದೆ.ವಾಸ್ತವವಾಗಿ, ಪ್ಯಾನ್-ಎಕೆಟಿ ಮತ್ತು ಸಕ್ರಿಯ ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಟೆಡ್ ಸೆರ್473-ಎಕೆಟಿಯ ಮಟ್ಟಗಳು ಸ್ಪೆಕ್1ಎಲ್ ರೂಪಾಂತರಿತ ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ ವಿವೊದಲ್ಲಿ E9.5 ಭ್ರೂಣ ಬಂಧನಕ್ಕೆ (Fig. 6A-D) ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ.ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಟೆಡ್ Ser473-AKT ಮಟ್ಟಗಳಲ್ಲಿನ ಇಳಿಕೆಯು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಪ್ಯಾನ್-ಎಕೆಟಿಯ ಮಟ್ಟದಲ್ಲಿನ ಇಳಿಕೆಯ ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿರಬಹುದು ವಿವೋ (FIG. 6E) ಮತ್ತು ಇನ್ ವಿಟ್ರೋ (FIG. 6F).U2OS ಜೀವಕೋಶಗಳು ಜೀವಕೋಶದ ಆಕಾರ ಮತ್ತು AJ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿನ ಬದಲಾವಣೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಬಲವಾಗಿ ಸಂಗಮಿಸಿದಾಗ ಮಾತ್ರ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಇಳಿಕೆ ಕಂಡುಬಂದಿದೆ (ಚಿತ್ರ 6D).ಹೀಗಾಗಿ, ನಮ್ಮ ಡೇಟಾವು SPECC1L ಕ್ರಾನಿಯೊಫೇಶಿಯಲ್ ಮಾರ್ಫೋಜೆನೆಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ PI3K-AKT ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್‌ನ ಹೊಸ ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಕವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
(A-E) E8.5 (A,B) ಮತ್ತು E9.5 (C,D) ತಲೆಬುರುಡೆ ವಿಭಾಗಗಳು ಅಥವಾ E9.5 ಲೈಸೇಟ್‌ಗಳು Specc1l ರೂಪಾಂತರಿತ ಭ್ರೂಣಗಳಿಂದ (E) ಸಕ್ರಿಯ ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಟೆಡ್ S473-AKT ಮತ್ತು ಪ್ಯಾನ್-AKT ಪ್ರೋಟೀನ್ ಕಡಿತದ ಮಟ್ಟವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ , ನಿಯಂತ್ರಣ WT ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ.ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಅದೇ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ವೈಲ್ಡ್-ಟೈಪ್ ಲೈಸೇಟ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ರೂಪಾಂತರಿತ ಲೈಸೇಟ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ನಡೆಸಲಾಯಿತು.SPECC1L ಗಾಗಿ ತೋರಿಸಲಾದ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಒಂದು ಬ್ಲಾಟ್‌ನಿಂದ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಲಾಗಿದೆ.ಅದೇ ಬ್ಲಾಟ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಆಂಟಿ-ಪ್ಯಾನ್-ಎಸಿಟಿ ಮತ್ತು β-ಆಕ್ಟಿನ್ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳೊಂದಿಗೆ ಮರು-ಪರೀಕ್ಷೆ ಮಾಡಲಾಯಿತು.E8.5 ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ (A, B) ಪ್ಯಾನ್-ಎಕೆಟಿ ಮಟ್ಟಗಳು ಮತ್ತು E9.5 ತಲೆಬುರುಡೆಯ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಟೆಡ್ S473-AKT ಮಟ್ಟಗಳು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ.(ಎಫ್) ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಗಮದಲ್ಲಿ ಕೊಯ್ಲು ಮಾಡಿದ SPECC1L-kd U2OS ಕೋಶಗಳ ಲೈಸೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ಯಾನ್-ಎಕೆಟಿ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಇದೇ ರೀತಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ದೋಷ ಪಟ್ಟಿಗಳು ಮೂರು ಸ್ವತಂತ್ರ ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟ್ ಪ್ರಮಾಣಗಳಿಂದ SEM ಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತವೆ.(GJ) E9.5 ನಲ್ಲಿನ WT ಭ್ರೂಣಗಳ ವಿಭಾಗಗಳು ಕ್ರಮವಾಗಿ KI67 ಮತ್ತು ಸೀಳಿದ ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್ 3 ನೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣಬಣ್ಣದವು, ಜೀವಕೋಶದ ಪ್ರಸರಣ (G, G') ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು (H, H') ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.Specc11 ರೂಪಾಂತರಿತ ಭ್ರೂಣಗಳು ಹೋಲಿಸಬಹುದಾದ ಜೀವಕೋಶದ ಪ್ರಸರಣವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ (I), ಆದರೆ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್‌ಗೆ ಒಳಗಾಗುವ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯು ಗಣನೀಯವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ (J).
ನಾವು ನಂತರ ಪ್ರಸರಣ ಮತ್ತು ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್‌ನ ಗುರುತುಗಳನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಿದ್ದೇವೆ.WT ಮ್ಯಟೆಂಟ್‌ಗಳಿಗೆ 82.5% ಪ್ರಸರಣ ಸೂಚ್ಯಂಕದೊಂದಿಗೆ E9.5 ಭ್ರೂಣಗಳ (Fig. 6E, G ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ G) ಪ್ರಸರಣದಲ್ಲಿ ನಾವು ಯಾವುದೇ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಗಮನಿಸಲಿಲ್ಲ ಮತ್ತು KI67 ಸ್ಟೆನಿಂಗ್‌ನಿಂದ ಅಳೆಯಲಾದ Spec1l ರೂಪಾಂತರಿತ ವ್ಯಕ್ತಿಗಳಿಗೆ 86.5% (p <0.56, ಫಿಶರ್ಸ್ ನಿಖರವಾದ ಪರೀಕ್ಷೆ).ಅಂತೆಯೇ, ಭ್ರೂಣ ಬಂಧನವಾಗುವವರೆಗೆ (ತೋರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ) (ತೋರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ) E8.5 ನಲ್ಲಿ ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ ಸೀಳಿರುವ ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್ 3 ಗಾಗಿ ಕಲೆ ಹಾಕುವ ಮೂಲಕ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ ನಾವು ಯಾವುದೇ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಗಮನಿಸಲಿಲ್ಲ.ಇದಕ್ಕೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿ, ಎಲ್ಲಾ E9.5 ರೂಪಾಂತರಿತ ಭ್ರೂಣಗಳಲ್ಲಿ (Fig. 6F, H ಮತ್ತು J) ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿಸಲಾಗಿದೆ.ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿನ ಈ ಒಟ್ಟಾರೆ ಹೆಚ್ಚಳವು ಕಡಿಮೆಯಾದ PI3K-AKT ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಆರಂಭಿಕ ಭ್ರೂಣದ ಮಾರಣಾಂತಿಕತೆಯೊಂದಿಗೆ ಸ್ಥಿರವಾಗಿದೆ29,30,31.
ಮುಂದೆ, ನಮ್ಮ kd ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ AJ ಬದಲಾವಣೆಗಳಲ್ಲಿ PI3K-AKT ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್‌ಗೆ ಸಾಂದರ್ಭಿಕ ಪಾತ್ರವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಲು, ನಾವು ನಿಯಂತ್ರಣ ಮತ್ತು kd ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಮಾರ್ಗವನ್ನು ರಾಸಾಯನಿಕವಾಗಿ ಬದಲಾಯಿಸಿದ್ದೇವೆ (ಚಿತ್ರ 7A-F).ಸಂಗಮ SPECC1L-kd ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಗಮನಿಸಿದ ಕೋಶದ ಆಕಾರ ಬದಲಾವಣೆಯ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಅನ್ನು ನಾವು ಮಾರ್ಕರ್ ಆಗಿ ಬಳಸಿದ್ದೇವೆ, ಅದನ್ನು ನಾವು ಉದ್ದವಾದ ಆಯಾಮದ (ಉದ್ದ) ಅನುಪಾತವನ್ನು ಅನುಗುಣವಾದ ಲಂಬ ಆಯಾಮಕ್ಕೆ (ಅಗಲ) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಿದ್ದೇವೆ.ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಸುತ್ತಿನಲ್ಲಿ ಅಥವಾ ಘನಾಕೃತಿಯ ಕೋಶಗಳಿಗೆ 1 ರ ಅನುಪಾತವನ್ನು ನಿರೀಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ (ಚಿತ್ರ 7G).ಜೀವಕೋಶದ ಆಕಾರದ ಜೊತೆಗೆ, ನಾವು β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ ಸ್ಟೇನಿಂಗ್ (Fig. 7A'-F') ಮೂಲಕ AJ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ದೃಢಪಡಿಸಿದ್ದೇವೆ.ನಿಯಂತ್ರಣ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ (ಚಿತ್ರ 7A,C) ಮತ್ತು AJ (ಚಿತ್ರ 7A') ಕೋಶದ ಆಕಾರವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಲು wortmannin ಬಳಸಿಕೊಂಡು PI3K-AKT ಮಾರ್ಗದ ಪ್ರತಿಬಂಧವು ಸಾಕಾಗುತ್ತದೆ.PI3K-AKT ಆಕ್ಟಿವೇಟರ್ SC-79 ನಿಯಂತ್ರಣ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶದ ಆಕಾರ (FIG. 7A, E) ಅಥವಾ AJ ವಿಸ್ತರಣೆ (FIG. 7A') ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಲಿಲ್ಲ.SPECC1L-kd ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ, PI3K-AKT ಮಾರ್ಗದ ಮತ್ತಷ್ಟು ನಿಗ್ರಹವು ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು (Fig. 7B,D) ಮತ್ತು β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ ಸ್ಟೈನಿಂಗ್‌ನಲ್ಲಿ (Fig. 7B') ಗಮನಾರ್ಹ ಹೆಚ್ಚಳಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು, ಇದು ನಮ್ಮ ಇನ್ ವಿವೋ ಹೆವಿ ಮ್ಯುಟೆಂಟ್‌ಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿರುತ್ತದೆ.ಮುಖ್ಯವಾಗಿ, PI3K-AKT ಮಾರ್ಗದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯು ಜೀವಕೋಶದ ಆಕಾರವನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಸುಧಾರಿಸಿದೆ (ಚಿತ್ರ 7B,F) ಮತ್ತು AJ ಫಿನೋಟೈಪ್‌ಗಳು (ಚಿತ್ರ 7B").ಜೀವಕೋಶದ ಆಕಾರದಲ್ಲಿನ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಸೆಲ್ ರೌಂಡ್‌ನೆಸ್ ಅನುಪಾತ (CCR) ಎಂದು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಮೇಲೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಮಹತ್ವಕ್ಕಾಗಿ ಹೋಲಿಸಲಾಗಿದೆ (FIG. 7G).ವಾಸ್ತವವಾಗಿ, ನಿಯಂತ್ರಣ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ (Fig. 7G, CCR = 1.56), ಜೀವಕೋಶದ ಆಕಾರವನ್ನು (Fig. 7G, CCR = 3.61, p <2.4 × 10-9) ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಬದಲಾಯಿಸಲು ವೋರ್ಟ್‌ಮ್ಯಾನಿನ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಸಾಕಾಗುತ್ತದೆ. SPECC1L ನಲ್ಲಿ.-kd ಜೀವಕೋಶಗಳು (Fig. 7G, CCR = 3.46).SPECC1L-kd ಜೀವಕೋಶಗಳ (Fig. 7G, CCR = 3.60, ಅತ್ಯಲ್ಪ) ವೋರ್ಟ್‌ಮ್ಯಾನಿನ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಸಂಸ್ಕರಿಸದ kd ಕೋಶಗಳಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಮಹತ್ವದ್ದಾಗಿರಲಿಲ್ಲ (Fig. 7G, CCR = 3.46, ಅತ್ಯಲ್ಪ) ಅಥವಾ wortmannin-ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನಿಯಂತ್ರಣ ಕೋಶಗಳು (Fig. 7G)., CCR = 3.46, ಅತ್ಯಲ್ಪ) ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ ಜೀವಕೋಶದ ವಿಸ್ತರಣೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ (7G, CCR = 3.61, ಅತ್ಯಲ್ಪ).ಬಹು ಮುಖ್ಯವಾಗಿ, SC-79 AKT ಆಕ್ಟಿವೇಟರ್ SPECC1L-kd ಕೋಶಗಳ ಉದ್ದವಾದ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಅನ್ನು ಮರುಸ್ಥಾಪಿಸಿತು (Fig. 7G, CCR = 1.74, p <6.2 × 10-12).ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು SPECC1L PI3K-AKT ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಅನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು SPECC1L ನಲ್ಲಿ ಮಧ್ಯಮ ಇಳಿಕೆಯು ಜೀವಕೋಶದ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಬಲವಾದ ಇಳಿಕೆಯು ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ (Fig. 8).
(A-F') ನಿಯಂತ್ರಣ (A, C, E) ಮತ್ತು SPECC1L-kd (B, D, F) ಕೋಶಗಳನ್ನು PI3K-AKT ಪಾಥ್‌ವೇ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ ವರ್ಟ್‌ಮನ್ನಿನ್ (C, D) ಅಥವಾ SC-79 ಆಕ್ಟಿವೇಟರ್ (E, F) ಚಿಕಿತ್ಸೆಯೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಗುತ್ತದೆ .ಸಂಸ್ಕರಣೆ ಮಾಡದ ನಿಯಂತ್ರಣ ಕೋಶಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯ β-ಕ್ಯಾಟ್ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಸ್ಟೈನಿಂಗ್ (A') ಜೊತೆಗೆ ಘನಾಕೃತಿಯ (A) ಆಗಿರುತ್ತವೆ, ಆದರೆ kd ಜೀವಕೋಶಗಳು (B) ಹೆಚ್ಚಿದ β-ಕ್ಯಾಟ್ ಸ್ಟೈನಿಂಗ್ (B') ಜೊತೆಗೆ ಉದ್ದವಾಗಿರುತ್ತವೆ.PI3K-AKT ಮಾರ್ಗವನ್ನು ನಿಗ್ರಹಿಸಿದ ನಂತರ, β-ಕ್ಯಾಟ್ ವಿಸ್ತರಣೆಯೊಂದಿಗೆ (C') ಉದ್ದವಾದ (C) ಕೋಶಗಳನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ, ಆದರೆ kd ಜೀವಕೋಶಗಳು ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ (D) ಗೆ ಒಳಗಾಗಲು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಿದವು, ನಮ್ಮ ಹೆಚ್ಚು ರೂಪಾಂತರಿತ ಭ್ರೂಣಗಳಂತೆಯೇ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚು ವರ್ಧಿತ β-ಬೆಕ್ಕನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ.ಕಲೆ ಹಾಕುವುದು (ಡಿ').PI3K-AKT ಮಾರ್ಗವನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಿದ ನಂತರ, ನಿಯಂತ್ರಣ ಕೋಶಗಳು ಘನಾಕೃತಿಯ (E) ಮತ್ತು ಸಾಮಾನ್ಯ β-ಬೆಕ್ಕು (E') ಕಲೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದವು, ಆದರೆ kd ಜೀವಕೋಶಗಳು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಸುಧಾರಿತ ಜೀವಕೋಶದ ಆಕಾರ (F) ಮತ್ತು β- ಬೆಕ್ಕು (F') ಬಣ್ಣವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ, ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ (ಜಿ) ಮೆಟಾಮಾರ್ಫ್ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು (ಎಎಫ್) ಕೋಶದ ಆಕಾರ ಬದಲಾವಣೆಯ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಅತಿ ಉದ್ದದ ಆಯಾಮದ (ಉದ್ದ) ಮತ್ತು ಅನುಗುಣವಾದ ಲಂಬ ಆಯಾಮದ (ಅಗಲ) ಸೆಲ್ ರೌಂಡ್‌ನೆಸ್ ಅನುಪಾತ (ಸಿಸಿಆರ್) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ.ಸಂಸ್ಕರಿಸದ (NT) SPECC1L-kd ಕೋಶಗಳು (CCR = 3.46) ನಿಯಂತ್ರಣ ಕೋಶಗಳಿಗಿಂತ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಉದ್ದವಾಗಿದೆ (CCR = 1.56, p <6.1 × 10-13).ನಿಯಂತ್ರಣ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ PI3K-AKT ಮಾರ್ಗದ ವರ್ಟ್‌ನ ಪ್ರತಿಬಂಧವು ಜೀವಕೋಶದ ಆಕಾರದಲ್ಲಿ ಒಂದೇ ರೀತಿಯ ವಿಸ್ತರಣೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಲು ಸಾಕಾಗುತ್ತದೆ (CCR=3.61, p<2.4×10-9).ಅಂತೆಯೇ, SPECC1L-kd ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ SC-79 ನಿಂದ AKT ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯು ಕೋಶದ ವಿಸ್ತರಣೆಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಣ ಮಟ್ಟಗಳಿಗೆ ಮರುಸ್ಥಾಪಿಸಿತು (CCR = 1.74, p <6.2 × 10-12).SPECC1L-kd ಕೋಶಗಳ ವರ್ಟ್‌ಮ್ಯಾನಿನ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು ಆದರೆ ಸಂಸ್ಕರಿಸದ kd (CCR=3.46, ns) ಅಥವಾ ವರ್ಟ್‌ಮ್ಯಾನಿನ್-ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನಿಯಂತ್ರಣ ಕೋಶಗಳಿಗೆ (3.61) ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಜೀವಕೋಶದ ಆಕಾರ ಬದಲಾವಣೆಯಲ್ಲಿ (CCR=3.60) ಹೆಚ್ಚಿನ ಹೆಚ್ಚಳ ಕಂಡುಬಂದಿಲ್ಲ.ns = ಪರವಾಗಿಲ್ಲ.+/- 50 ಸೆಲ್‌ಗಳಿಗೆ SEM ಅಳತೆಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಅಂಕಿಅಂಶಗಳ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗಿದೆ.
(A) ಕ್ರಮವಾಗಿ AJ ಬದಲಾವಣೆಗಳು ಮತ್ತು ಪಾರುಗಾಣಿಕಾದಲ್ಲಿ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ PI3K-AKT ಮಾರ್ಗದ ಪ್ರತಿಬಂಧ ಮತ್ತು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ ಸ್ಕೀಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಪ್ರಾತಿನಿಧ್ಯ.(B) SPECC1L ನಿಂದ AKT ಪ್ರೊಟೀನ್ ಸ್ಥಿರೀಕರಣಕ್ಕಾಗಿ ಪ್ರಸ್ತಾವಿತ ಮಾದರಿ.
ಪೂರ್ವಭಾವಿ ಸಿಎನ್‌ಸಿಸಿಗಳಿಗೆ ಮುಂಭಾಗದ ನರಗಳ ಪದರದ ನ್ಯೂರೋಪಿಥೇಲಿಯಲ್ ಕೋಶಗಳು1,15,32 ನಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು AJ ಲೈಸಿಸ್ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ.AJ ಘಟಕಗಳ ಹೆಚ್ಚಿದ ಕಲೆಗಳು ಮತ್ತು SPECC1L-ಕೊರತೆಯ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಅಪಿಕಲ್-ಬೇಸಲ್ AJ ಅಸಮಪಾರ್ಶ್ವದ ವಿತರಣೆಯ ನಷ್ಟವು ವಿಟ್ರೊ ಮತ್ತು ವಿವೊದಲ್ಲಿ, SPECC1L ನ ಭೌತಿಕ ಸಾಮೀಪ್ಯವನ್ನು β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸುತ್ತದೆ, SPECC1L AJ ಸ್ಥಳೀಯ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಸರಿಯಾಗಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ ಸಂಘಟನೆಯ ಸ್ನಾಯುಗಳು.ಆಕ್ಟಿನ್ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್.ಆಕ್ಟಿನ್ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್ ಮತ್ತು β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್‌ನೊಂದಿಗೆ SPECC1L ನ ಸಂಯೋಜನೆ ಮತ್ತು SPECC1L ಅನುಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಮಂದಗೊಳಿಸಿದ ಆಕ್ಟಿನ್ ತಂತುಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯಲ್ಲಿನ ಹೆಚ್ಚಳವು AJ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವ ಹೆಚ್ಚಳಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿರುತ್ತದೆ.ಮತ್ತೊಂದು ಸಾಧ್ಯತೆಯೆಂದರೆ SPECC1L-ಕೊರತೆಯ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿದ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಆಕ್ಟಿನ್ ಫೈಬರ್‌ಗಳು ಅಂತರಕೋಶದ ಒತ್ತಡದಲ್ಲಿ ಬದಲಾವಣೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಒತ್ತಡವು AJ 33 ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್‌ನ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವುದರಿಂದ, ವೋಲ್ಟೇಜ್ ಬದಲಾವಣೆಗಳು ಹೆಚ್ಚು ಪ್ರಸರಣ AJ 34 ಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು.ಆದ್ದರಿಂದ ಯಾವುದೇ ಬದಲಾವಣೆಗಳು CNCC ಲೇಯರ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತವೆ.
Wnt1 ಅನ್ನು ಆರಂಭಿಕ ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅದು ನರ ಕ್ರೆಸ್ಟ್ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.ಹೀಗಾಗಿ, Wnt1-cre ವಂಶಾವಳಿಯ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವಿಕೆಯು NCC35 ಪೂರ್ವ ಮತ್ತು ವಲಸೆ ಎರಡನ್ನೂ ಗುರುತಿಸುತ್ತದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, Wnt1 ಆರಂಭಿಕ ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳಿಂದ ಪಡೆದ ಡೋರ್ಸಲ್ ಮೆದುಳಿನ ಅಂಗಾಂಶದ ತದ್ರೂಪುಗಳನ್ನು ಸಹ ಗುರುತಿಸುತ್ತದೆ 35,36 , ಇದು ತೆರೆದ ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ Wnt1 ಮಾರ್ಕರ್‌ಗಳಿಗೆ E9.5 ರೂಪಾಂತರಿತ ರೂಪಗಳನ್ನು ನೀಡುವುದು CNCC ಅಲ್ಲ.NCC ಮಾರ್ಕರ್‌ಗಳಾದ AP2A ಮತ್ತು SOX10 ಗಾಗಿ ನಮ್ಮ ಧನಾತ್ಮಕ ಬಣ್ಣವು Specc11 ರೂಪಾಂತರಿತ ಭ್ರೂಣಗಳ ಬಹಿರಂಗವಾದ ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳು ನಿಜವಾಗಿಯೂ CNCC ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿವೆ ಎಂದು ದೃಢಪಡಿಸಿದೆ.ಇದರ ಜೊತೆಯಲ್ಲಿ, AP2A ಮತ್ತು SOX10 ಗಳು ಆರಂಭಿಕ ವಲಸೆಯ NCC ಯ ಮಾರ್ಕರ್‌ಗಳಾಗಿರುವುದರಿಂದ, ಈ ಜೀವಕೋಶಗಳು E9.5 ನಿಂದ ಶ್ರೇಣೀಕರಿಸಲಾಗದ ವಲಸೆಯ ನಂತರದ CNCC ಎಂದು ಧನಾತ್ಮಕ ಕಲೆಗಳು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ.
SPECC1L ನಿಂದ AJ ಯ ಆಣ್ವಿಕ ನಿಯಂತ್ರಣವು PI3K-AKT ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್‌ನಿಂದ ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆ ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಮ್ಮ ಡೇಟಾ ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.SPECC1L ಕೊರತೆಯಿರುವ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ AKT ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ.Fantauzzo ಮತ್ತು ಇತರರಿಂದ ಸಂಶೋಧನೆಗಳು.ಕ್ರ್ಯಾನಿಯೊಫೇಶಿಯಲ್ ಮಾರ್ಫೋಜೆನೆಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ PI3K-AKT ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್‌ಗೆ ನೇರ ಪಾತ್ರವನ್ನು ಬೆಂಬಲಿಸುತ್ತದೆ.(2014) PDGFRα-ಆಧಾರಿತ PI3K-AKT ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್‌ನ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ ಕೊರತೆಯು ಸೀಳು ಅಂಗುಳಿನ ಫಿನೋಟೈಪ್‌ಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ.U2OS ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ AJ ಮತ್ತು ಕೋಶದ ಆಕಾರವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಲು PI3K-AKT ಮಾರ್ಗದ ಪ್ರತಿಬಂಧವು ಸಾಕಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಾವು ತೋರಿಸುತ್ತೇವೆ.ನಮ್ಮ ಸಂಶೋಧನೆಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ, ಕೇನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು.37 ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ PI3K α110 ಉಪಘಟಕದ ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯು ಪೆರಿಸೆಲ್ಯುಲರ್ β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ ಸ್ಟೈನಿಂಗ್‌ನಲ್ಲಿ ಇದೇ ರೀತಿಯ ಹೆಚ್ಚಳಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ, ಇದನ್ನು "ಸಂಪರ್ಕ ಸೂಚ್ಯಂಕ" ನಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಳ ಎಂದು ಉಲ್ಲೇಖಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಆಕ್ಟಿನ್ ತಂತುಗಳು ಈಗಾಗಲೇ ಹೆಚ್ಚು ಸಂಘಟಿತವಾಗಿವೆ, PI3K-AKT ಮಾರ್ಗದ ನಿಗ್ರಹವು ಸಡಿಲವಾದ ಕೋಶದ ಆಕಾರಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.ಇದಕ್ಕೆ ವಿರುದ್ಧವಾಗಿ, SPECC1L-kd U2OS ಕೋಶಗಳು ಉದ್ದವಾದ ಕೋಶದ ಆಕಾರವನ್ನು ತೋರಿಸಿವೆ.ಈ ವ್ಯತ್ಯಾಸವು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸೆಲ್ ಪ್ರಕಾರವಾಗಿರಬಹುದು.PI3K-AKT ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್‌ನ ನಿಗ್ರಹವು ಆಕ್ಟಿನ್ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್‌ನ ಮೇಲೆ ಶಾಶ್ವತವಾಗಿ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ, ಕೋಶದ ಆಕಾರದ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮವು ಕೇಂದ್ರೀಯ ಆಕ್ಟಿನ್ ಫೈಬರ್‌ಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆ ಮತ್ತು ಸಂಘಟನೆಯಲ್ಲಿನ ಬದಲಾವಣೆಗಳಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಒತ್ತಡದಲ್ಲಿನ ಬದಲಾವಣೆಗಳಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಲ್ಪಡುತ್ತದೆ.U2OS ಸೆಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ, SPECC1L-ಕೊರತೆಯ AJ ಬದಲಾವಣೆ ಮತ್ತು ಚೇತರಿಕೆಯ ಮಾರ್ಕರ್‌ನಂತೆ ನಾವು ಸೆಲ್ ಆಕಾರ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಮಾತ್ರ ಬಳಸಿದ್ದೇವೆ.ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ, SPECC1L ಕೊರತೆಯಲ್ಲಿ AKT ಮಾರ್ಗದ ಪ್ರತಿಬಂಧವು AJ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು CNCC ನಲ್ಲಿ ಡಿಲಾಮಿನೇಷನ್ ಅನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಾವು ಊಹಿಸುತ್ತೇವೆ.
ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, SPECC1L ಅನುಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಟೆಡ್ 473-AKT ಮಟ್ಟಗಳ ಜೊತೆಗೆ ವಿಟ್ರೊ ಮತ್ತು ವಿವೊದಲ್ಲಿ ಪ್ಯಾನ್-ಎಕೆಟಿ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು, ಇದು ಎಕೆಟಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸ್ಥಿರತೆ ಅಥವಾ ವಹಿವಾಟಿನ ಮಟ್ಟದಲ್ಲಿ PI3K-AKT ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್‌ನ ನಿಯಂತ್ರಣವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.SPECC1L ಮತ್ತು MID1 ಜೀನ್‌ಗಳು, ಒಪಿಟ್ಜ್/GBBB ಸಿಂಡ್ರೋಮ್‌ಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿವೆ, ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬುಲ್‌ಗಳನ್ನು 18,22 ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸುವ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಎನ್‌ಕೋಡ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ.SPECC1L ಮತ್ತು MID1 ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಸ್ಥಿರೀಕರಣವನ್ನು ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆ ಮಾಡುವ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲಾಗಿಲ್ಲ.SPECC1L ನ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ, ಈ ಸ್ಥಿರೀಕರಣವು ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳ ಉಪವಿಭಾಗದ ವರ್ಧಿತ ಅಸಿಟೈಲೇಶನ್ ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ 18 .AKT ಯಂತಹ ಇತರ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸಲು SPECC1L ಇದೇ ರೀತಿಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸುವ ಸಾಧ್ಯತೆಯಿದೆ.ಎಕೆಟಿ ಪ್ರೊಟೀನ್‌ನಲ್ಲಿನ ಲೈಸಿನ್ ಅವಶೇಷಗಳ ಅಸಿಟೈಲೇಶನ್ ಪೊರೆಯ ಸ್ಥಳೀಕರಣ ಮತ್ತು ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಶನ್‌ನಲ್ಲಿ ಇಳಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, AKT ಯಲ್ಲಿ ಅದೇ ಲೈಸಿನ್ ಶೇಷದಲ್ಲಿ K63 ಸರಪಳಿಯ ಸರ್ವತ್ರೀಕರಣವು ಅದರ ಮೆಂಬರೇನ್ ಸ್ಥಳೀಕರಣ ಮತ್ತು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಗೆ ಅಗತ್ಯವಾಗಿರುತ್ತದೆ39,40.ವಿವಿಧ ಹೈ ಥ್ರೋಪುಟ್ ಯೀಸ್ಟ್ ಎರಡು-ಹೈಬ್ರಿಡ್ ಪರದೆಗಳಲ್ಲಿ ಗುರುತಿಸಲಾದ SPECC1L ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂವಹನ ನಡೆಸುವ ಹಲವಾರು ಅಂಶಗಳಲ್ಲಿ, ನಾಲ್ಕು - CCDC841, ECM2942, APC ಮತ್ತು UBE2I43 - ಸರ್ವತ್ರ ಅಥವಾ ಸುಮೊಯ್ಲೇಷನ್ ಮೂಲಕ ಪ್ರೋಟೀನ್ ವಹಿವಾಟು ಅಥವಾ ಸ್ಥಿರತೆಯಲ್ಲಿ ತೊಡಗಿಸಿಕೊಂಡಿದೆ.SPECC1L AKT ಲೈಸಿನ್ ಅವಶೇಷಗಳ ಅನುವಾದದ ನಂತರದ ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳಲ್ಲಿ ತೊಡಗಿಸಿಕೊಂಡಿರಬಹುದು, ಇದು AKT ಸ್ಥಿರತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, AKT ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ಸ್ಥಳೀಕರಣ ಮತ್ತು ಸ್ಥಿರತೆಯಲ್ಲಿ SPECC1L ನ ನಿರ್ಣಾಯಕ ಪಾತ್ರವನ್ನು ಸ್ಪಷ್ಟಪಡಿಸಬೇಕಾಗಿದೆ.
ವಿವೋದಲ್ಲಿನ SPECC1L ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯಲ್ಲಿನ ತೀವ್ರ ದೋಷಗಳು ಹೆಚ್ಚಿದ AJ ಮಾರ್ಕರ್ ಸ್ಟೈನಿಂಗ್ ಮತ್ತು ದೋಷಯುಕ್ತ CNCC ಓವರ್‌ಲೇಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು, ಜೊತೆಗೆ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಆರಂಭಿಕ ಭ್ರೂಣದ ಮಾರಣಾಂತಿಕತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು.ಹಿಂದಿನ ವರದಿಗಳು ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್‌ನ ಹೆಚ್ಚಿದ ಮಟ್ಟಗಳೊಂದಿಗೆ ಮೌಸ್ ಮ್ಯಟೆಂಟ್‌ಗಳು ನರ ಕೊಳವೆ ದೋಷಗಳು 44,45,46,47 ಮತ್ತು ಕ್ರ್ಯಾನಿಯೊಫೇಶಿಯಲ್ ದೋಷಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿವೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿವೆ.ನರಗಳ ಮಡಿಕೆಗಳು ಅಥವಾ ಫಾರಂಜಿಲ್ ಕಮಾನುಗಳಲ್ಲಿ ಅತಿಯಾದ ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವು ಸರಿಯಾದ ಮಾರ್ಫೊಜೆನೆಟಿಕ್ ಚಲನೆಗೆ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಸಾಕಷ್ಟು ಸಂಖ್ಯೆಯ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸಲಾಗಿದೆ 48,49,50.ಇದಕ್ಕೆ ವಿರುದ್ಧವಾಗಿ, ಮಧ್ಯಮ ಕಡಿಮೆಯಾದ SPECC1L ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯೊಂದಿಗೆ ನಮ್ಮ SPECC1L ಕೊರತೆಯ ಸೆಲ್ ಲೈನ್‌ಗಳು ಹೆಚ್ಚಿದ ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವಿನ ಪುರಾವೆಗಳಿಲ್ಲದೆ AJ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಮಾತ್ರ ತೋರಿಸಿದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಈ Kd ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ PI3K-AKT ಮಾರ್ಗದ ರಾಸಾಯನಿಕ ಪ್ರತಿಬಂಧವು ಹೆಚ್ಚಿದ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್‌ಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು.ಹೀಗಾಗಿ, SPECC1L ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಅಥವಾ ಕಾರ್ಯದಲ್ಲಿ ಮಧ್ಯಮ ಇಳಿಕೆಯು ಜೀವಕೋಶದ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸುತ್ತದೆ.ಇದು ಅಪರೂಪದ Specc11 ರೂಪಾಂತರಿತ ಭ್ರೂಣಗಳು st ನಲ್ಲಿ ಬಂಧನದಿಂದ ತಪ್ಪಿಸಿಕೊಳ್ಳುವ ವೀಕ್ಷಣೆಯೊಂದಿಗೆ ಸ್ಥಿರವಾಗಿದೆ.E9.5-ಬಹುಶಃ ಕಡಿಮೆಯಾದ ಜೀನ್ ಕ್ಯಾಪ್ಚರ್ ದಕ್ಷತೆಯ ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿ-ಅವರ ನರ ಕೊಳವೆಗಳನ್ನು ಮುಚ್ಚಲು ಮತ್ತು ಬೆಳವಣಿಗೆಯಲ್ಲಿ ನಂತರ ನಿಲ್ಲಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುತ್ತದೆ, ಆಗಾಗ್ಗೆ ಕ್ರಾನಿಯೊಫೇಶಿಯಲ್ ದೋಷಗಳೊಂದಿಗೆ (Fig. S3).ಕ್ರ್ಯಾನಿಯೊಫೇಶಿಯಲ್ ಅಸಹಜತೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೆಟೆರೊಜೈಗಸ್ ಸ್ಪೆಕ್1ಎಲ್ ಭ್ರೂಣಗಳ ಅಪರೂಪದ ಸಂಭವವೂ ಇದಕ್ಕೆ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗಿದೆ-ಬಹುಶಃ ಹೆಚ್ಚಿದ ಜೀನ್ ಕ್ಯಾಪ್ಚರ್ ದಕ್ಷತೆಯಿಂದಾಗಿ-ಹಾಗೆಯೇ ಜೀಬ್ರಾಫಿಶ್‌ನಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವ ಎರಡು SPECC1L ಆರ್ಥೋಲಾಗ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದು (ಸ್ಪೆಕ್1 ಎಲ್ಬಿ) ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ ಭ್ರೂಣದ ನಷ್ಟವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ. ಕೆಳಗಿನ ದವಡೆಗಳು ಮತ್ತು ದ್ವಿಪಕ್ಷೀಯ ಸೀಳುಗಳು51.ಹೀಗಾಗಿ, ಮಾನವ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಗುರುತಿಸಲಾದ ಹೆಟೆರೊಜೈಗಸ್ SPECC1L ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಣೆಯ ನಷ್ಟದ ರೂಪಾಂತರಗಳು ಕ್ರಾನಿಯೊಫೇಶಿಯಲ್ ಮಾರ್ಫೋಜೆನೆಸಿಸ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ SPECC1L ಕಾರ್ಯದಲ್ಲಿ ಸಣ್ಣ ದುರ್ಬಲತೆಗಳನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಬಹುದು, ಇದು ಅವರ ಓರೊಫೇಶಿಯಲ್ ಸೀಳುಗಳನ್ನು ವಿವರಿಸಲು ಸಾಕಾಗುತ್ತದೆ.SPECC1L-ಆಧಾರಿತ ಇಂಟರ್ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಸಂಪರ್ಕಗಳ ನಿಯಂತ್ರಣವು ಪ್ಯಾಲಾಟೋಜೆನೆಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಫಾರಂಜಿಲ್ ಕಮಾನುಗಳ ಸಮ್ಮಿಳನದಲ್ಲಿ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ.SPECC1L ಕಾರ್ಯದ ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ನ್ಯೂರೋಪಿಥೇಲಿಯಲ್ ಸೆಲ್ ಮೋಟಿಲಿಟಿ ಮತ್ತು ಕ್ರ್ಯಾನಿಯೊಫೇಶಿಯಲ್ ಮಾರ್ಫೋಜೆನೆಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ ನರ ಕೊಳವೆ ಮುಚ್ಚುವಿಕೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ CNCC ಯಲ್ಲಿ ತಾತ್ಕಾಲಿಕ ಇಂಟರ್ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಸಂಪರ್ಕಗಳ ಪಾತ್ರವನ್ನು ಸ್ಪಷ್ಟಪಡಿಸಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
U2OS ಆಸ್ಟಿಯೊಸಾರ್ಕೊಮಾ ನಿಯಂತ್ರಣ ಮತ್ತು SPECC1L-kd ಕೋಶಗಳನ್ನು ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಲಾಗಿದೆ (ಸಾದಿ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2011).SPECC1L ವಿರುದ್ಧ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳನ್ನು ಸಹ ಈ ಹಿಂದೆ ನಿರೂಪಿಸಲಾಗಿದೆ (ಸಾದಿ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2011).ಆಂಟಿ-β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳು (ಮೊಲ; 1:1000; ಸಾಂಟಾ ಕ್ರೂಜ್, ಡಲ್ಲಾಸ್, TX) (ಮೌಸ್; 1:1000; ಸೆಲ್ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜಿ, ಡ್ಯಾನ್ವರ್ಸ್, MA), ಮೈಯೋಸಿನ್ IIb (1:1000; ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್, ಸೇಂಟ್ ಲೂಯಿಸ್ ) , MO) ), ಇ-ಕ್ಯಾಥರಿನ್ (1:1000; ಅಬ್ಕಾಮ್, ಕೇಂಬ್ರಿಡ್ಜ್, MA), AP2A (1:1000; ನೋವಸ್ ಬಯೋಲಾಜಿಕಲ್ಸ್, ಲಿಟಲ್‌ಟನ್, ಕೊಲೊ.), SOX10 (1:1000; 1000; ಅವಿವಾ ಸಿಸ್ಟಮ್ಸ್ ಬಯಾಲಜಿ, ಸ್ಯಾನ್ ಡಿಯಾಗೋ , ಕ್ಯಾಲಿಫೋರ್ನಿಯಾ), DLX2 (1:1000; Abcam, ಕೇಂಬ್ರಿಡ್ಜ್, MA), phospho-Ser473-AKT (1:1000; ಸೆಲ್ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜಿ, ಡ್ಯಾನ್ವರ್ಸ್, MA), pan-AKT (1:1000; ThermoFisher ಸೈಂಟಿಫಿಕ್, ವಾಲ್ಥಮ್ ) , KI67 (1:1000; ಸೆಲ್ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜಿ, ಡ್ಯಾನ್ವರ್ಸ್, MA), ಕ್ಲೀವ್ಡ್ ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್ 3 (1:1000; ಸೆಲ್ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜಿ, ಡ್ಯಾನ್ವರ್ಸ್, MA) ಮತ್ತು β-ಆಕ್ಟಿನ್ (1:2500; ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್, ಸೇಂಟ್ ಲೂಯಿಸ್ MO ) ಅನ್ನು ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ..ಆಕ್ಟಿನ್ ಫಿಲಾಮೆಂಟ್ಸ್ ಅನ್ನು ಆಕ್ಟಿ-ಸ್ಟೈನ್ ರೋಡಮೈನ್ ಫಾಲೋಡಿನ್ (ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್, ಡೆನ್ವರ್, ಕೊಲೊರಾಡೋ) ನೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣಿಸಲಾಗಿದೆ.
U2OS ನಿಯಂತ್ರಣ ಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು SPECC1L-kd ಕೋಶಗಳನ್ನು 10% ಭ್ರೂಣದ ಬೋವಿನ್ ಸೀರಮ್‌ನೊಂದಿಗೆ (ಲೈಫ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್, ಕಾರ್ಲ್ಸ್‌ಬಾಡ್, CA) ಪೂರಕವಾದ ಪ್ರಮಾಣಿತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಗ್ಲೂಕೋಸ್ DMEM ನಲ್ಲಿ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.AJ ಬದಲಾವಣೆಗಳಿಗಾಗಿ, 2 x 105 ಕೋಶಗಳನ್ನು ಗಾಜಿನ ಮೇಲೆ 0.1% ಪೋರ್ಸಿನ್ ಜೆಲಾಟಿನ್ (ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್, ಸೇಂಟ್ ಲೂಯಿಸ್, MO) ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಸ್ಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ಆಕಾರದಲ್ಲಿ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು.ಕೋಶಗಳನ್ನು ವಿವಿಧ ಸೂಚಿಸಿದ ಸಮಯದ ಬಿಂದುಗಳಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗಿದೆ: ಬಿತ್ತನೆ ಮಾಡಿದ 4 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ (t = 1), ಬಿತ್ತನೆಯ 24 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ (t = 2), ಜೀವಕೋಶದ ಆಕಾರದಲ್ಲಿ ಬದಲಾವಣೆಯಿಲ್ಲದೆ ಸಂಗಮ (t = 3), ಕೋಶದ ಆಕಾರದಲ್ಲಿ ಬದಲಾವಣೆ (t = 4) , ಜೀವಕೋಶದ ಆಕಾರ ಬದಲಾವಣೆಯ ನಂತರ 24 ಗಂ (t = 5) ಮತ್ತು 48 ಗಂ ಜೀವಕೋಶದ ಆಕಾರ ಬದಲಾವಣೆಯ ನಂತರ (t = 6) (ಚಿತ್ರ 1, 2, 3).PI3K-AKT ಮಾರ್ಗವನ್ನು ಮಾಡ್ಯುಲೇಟ್ ಮಾಡಲು, PI3K-AKT ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ ವರ್ಟ್‌ಮನ್ನಿನ್ (TOCRIS ಬಯೋಸೈನ್ಸ್, ಮಿನ್ನಿಯಾಪೋಲಿಸ್, ಮಿನ್ನೇಸೋಟ) ಅಥವಾ SC-79 ಆಕ್ಟಿವೇಟರ್ (TOCRIS ಬಯೋಸೈನ್ಸ್, ಮಿನ್ನಿಯಾಪೋಲಿಸ್ ಆಡಮ್ಸ್) ನೊಂದಿಗೆ ಸೂಚಿಸಲಾದ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಬೆಳೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ರಾಸಾಯನಿಕಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಪ್ರತಿದಿನ ಬದಲಾಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಸಾಮಾನ್ಯ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಲೈವ್ ಕಂಟ್ರೋಲ್ ಮತ್ತು KD ಸೆಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಫ್ರೇಮ್-ಬೈ-ಫ್ರೇಮ್ ರೆಕಾರ್ಡಿಂಗ್‌ಗಳನ್ನು ಮಾಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಪ್ರತಿ 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 7 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಹಂತದ ಕಾಂಟ್ರಾಸ್ಟ್ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಗಣಕಯಂತ್ರ-ನಿಯಂತ್ರಿತ ಲೈಕಾ DM IRB ವಿಲೋಮ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಸ್ವಾಧೀನಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲಾಗಿದೆ, ಇದು ಯಾಂತ್ರಿಕ ಹಂತವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು QImaging Retiga-SRV ಕ್ಯಾಮರಾಕ್ಕೆ ಸಂಪರ್ಕಗೊಂಡಿರುವ 10 × N-PLAN ಉದ್ದೇಶವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.ಇಮೇಜಿಂಗ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, 5% CO2 ನೊಂದಿಗೆ ಆರ್ದ್ರ ವಾತಾವರಣದಲ್ಲಿ ಸೆಲ್ ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳನ್ನು 37 ° C ನಲ್ಲಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಪ್ರಾದೇಶಿಕ ರೂಪಾಂತರಿತ ಮೌಸ್ ಸಂಪನ್ಮೂಲ ಕೇಂದ್ರದಿಂದ (UC ಡೇವಿಸ್, CA) ಎರಡು ಜೀನ್ ಟ್ರ್ಯಾಪ್ ES ಸೆಲ್ ಲೈನ್‌ಗಳು DTM096 ಮತ್ತು RRH048 ಅನ್ನು Specc11 ಕೊರತೆಯಿರುವ ಮೌಸ್ ಲೈನ್‌ಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ, ಗೊತ್ತುಪಡಿಸಿದ Specc1lgtDTM096 ಮತ್ತು Specc1lgtRRH046.ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ, 129/REJ ES ಕೋಶಗಳನ್ನು C57BL6 ಬ್ಲಾಸ್ಟೊಸಿಸ್ಟ್‌ಗಳಿಗೆ ಚುಚ್ಚಲಾಯಿತು.ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಚಿಮೆರಿಕ್ ಗಂಡು ಇಲಿಗಳನ್ನು ಹೆಣ್ಣು C57BL6 ಇಲಿಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಗೌಟಿ ಕೋಟ್ ಬಣ್ಣದೊಂದಿಗೆ ಸಂತತಿಯನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು.ಜೀನ್ ಟ್ರ್ಯಾಪ್ ವೆಕ್ಟರ್ ಇನ್ಸರ್ಟ್‌ಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಹೆಟೆರೋಜೈಗೋಟ್‌ಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಬಳಸಲಾಯಿತು.ಇಲಿಗಳನ್ನು 129/REJ;C57BL6 ಮಿಶ್ರ ಹಿನ್ನೆಲೆಯಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗಿತ್ತು.ಜೆನೆಟಿಕ್ ಟ್ರ್ಯಾಪ್ ವೆಕ್ಟರ್‌ನ ಅಳವಡಿಕೆ ಸೈಟ್‌ನ ಸ್ಥಳವನ್ನು RT-PCR, ಜೀನೋಮ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಜೆನೆಟಿಕ್ ಕಾಂಪ್ಲಿಮೆಂಟೇಶನ್ ಮೂಲಕ ದೃಢೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ (ಅನುಬಂಧ ಚಿತ್ರ 1).ಡಬಲ್ ಹೆಟೆರೋಜೈಗಸ್ Specc1lGT ಇಲಿಗಳ CNCC ವಂಶಾವಳಿಯನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು, ROSAmTmG (#007576) ಮತ್ತು Wnt1-Cre (#003829) ಇಲಿಗಳು (ಜಾಕ್ಸನ್ ಲ್ಯಾಬೋರೇಟರಿ, ಬಾರ್ ಹಾರ್ಬರ್, ME) ROSAmTmG ಮತ್ತು Wnt1-Speccre ಎಲ್ಲಾ ಎಸ್‌ಪೆಕ್ರೆ ಎಮ್‌ಪಿಕ್ರೆಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ದಾಟಲಾಯಿತು.ಕನ್ಸಾಸ್ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾಲಯದ ವೈದ್ಯಕೀಯ ಕೇಂದ್ರದ ಸಾಂಸ್ಥಿಕ ಪ್ರಾಣಿಗಳ ಆರೈಕೆ ಮತ್ತು ಬಳಕೆಯ ಸಮಿತಿಯು ಅನುಮೋದಿಸಿದ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್‌ಗಳ ಪ್ರಕಾರ ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿನ ಎಲ್ಲಾ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.
ಕೊಠಡಿ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ 60 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಭ್ರೂಣಗಳನ್ನು (1% ಫಾರ್ಮಾಲ್ಡಿಹೈಡ್, 0.2% ಗ್ಲುಟರಾಲ್ಡಿಹೈಡ್, 2 mM MgCl2, 0.02% NP-40, 5 mM EGTA) ನಲ್ಲಿ ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ.X-ಗ್ಯಾಲ್ ಸ್ಟೇನಿಂಗ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಸ್ಥಿರೀಕರಣದ ನಂತರ (5 mM ಪೊಟ್ಯಾಸಿಯಮ್ ಫೆರಿಕ್ಯಾನೈಡ್, 5 mM ಪೊಟ್ಯಾಸಿಯಮ್ ಫೆರೋಸೈನೈಡ್, 2 mM MgCl2, 0.01% ಸೋಡಿಯಂ ಡಿಯೋಕ್ಸಿಕೋಲೇಟ್, 0.02% NP-40, 1 mg/ml X-gal) ಸ್ಟೇನ್ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯನ್ನು 37 ° C ನಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು. .1-6 ಗಂಟೆಗಳ ಒಳಗೆ °C.ಭ್ರೂಣಗಳನ್ನು 4% PFA ನಲ್ಲಿ ಪೋಸ್ಟ್-ಫಿಕ್ಸ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ದೃಶ್ಯೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಪಾಶ್ಚಾತ್ಯ ಬ್ಲಾಟಿಂಗ್‌ಗಾಗಿ, HALT ಪ್ರೋಟೀಸ್ ಇನ್‌ಹಿಬಿಟರ್‌ಗಳ (ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್, ಸೇಂಟ್ ಲೂಯಿಸ್, MO) ಮಿಶ್ರಣದೊಂದಿಗೆ ಪೂರಕವಾದ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯ ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್ (ಪ್ರೊಮೆಗಾ, ಫಿಚ್‌ಬರ್ಗ್, WI) ನಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಲೈಸ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ಲೈಸೇಟ್‌ಗಳನ್ನು 12% ಪಾಲಿಅಕ್ರಿಲಮೈಡ್ ಮಿನಿ-ಪ್ರೊಟೀನ್ ಟಿಜಿಎಕ್ಸ್ ರೆಡಿಮೇಡ್ ಜೆಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ (ಬಯೋ-ರಾಡ್, ಹರ್ಕ್ಯುಲಸ್, ಸಿಎ) ಸಂಸ್ಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಇಮ್ಮೊಬಿಲಾನ್ ಪಿವಿಡಿಎಫ್ ಮೆಂಬರೇನ್‌ಗಳಿಗೆ (ಇಎಮ್‌ಡಿ ಮಿಲಿಪೋರ್, ಬಿಲ್ಲೆರಿಕಾ, ಎಂಎ) ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಯಿತು.0.1% ಟ್ವೀನ್ ಹೊಂದಿರುವ PBS ನಲ್ಲಿ 5% ಹಾಲಿನಲ್ಲಿ ಪೊರೆಗಳನ್ನು ನಿರ್ಬಂಧಿಸಲಾಗಿದೆ.ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳನ್ನು ರಾತ್ರಿಯಲ್ಲಿ 4 ° C ನಲ್ಲಿ ಅಥವಾ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಒಂದು ಗಂಟೆಯವರೆಗೆ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ಫೆಮ್ಟೋ ಸೂಪರ್ ಸಿಗ್ನಲ್ ವೆಸ್ಟ್ ಇಸಿಎಲ್ ಕಾರಕವನ್ನು (ಥರ್ಮೋ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್, ವಾಲ್ಥಮ್, ಎಂಎ) ಸಿಗ್ನಲ್ ಉತ್ಪಾದನೆಗೆ ಬಳಸಲಾಯಿತು.ಇಮ್ಯುನೊಸ್ಟೈನಿಂಗ್ಗಾಗಿ, ಭ್ರೂಣಗಳನ್ನು ರಾತ್ರಿಯಲ್ಲಿ 4% PFA/PBS ನಲ್ಲಿ ಸರಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಕ್ರಯೋಪ್ರೆಸರ್ವ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.1% ಸಾಮಾನ್ಯ ಮೇಕೆ ಸೀರಮ್ (ಥರ್ಮೋ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್, ವಾಲ್ಥಮ್, MA) ಮತ್ತು 0.1% ಟ್ರೈಟಾನ್ X-100 (ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್, ಸೇಂಟ್ ಲೂಯಿಸ್, MO) ಹೊಂದಿರುವ PBS ನಲ್ಲಿ ಅಂಗಾಂಶ ಕ್ರಯೋಸೆಕ್ಷನ್‌ಗಳನ್ನು ನಿರ್ಬಂಧಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್‌ನಲ್ಲಿ 4 ° C ನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ರಾತ್ರಿ.ಪ್ರತಿಕಾಯ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸೆಕೆಂಡರಿ ಪ್ರತಿಕಾಯದೊಂದಿಗೆ (1:1000) 1 ಗಂಟೆಗೆ 4 ° C ನಲ್ಲಿ.ಬಣ್ಣದ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಪ್ರೋಲಾಂಗ್ ಚಿನ್ನದ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗಿದೆ (ಥರ್ಮೋ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್, ವಾಲ್ಥಮ್ ಎಂಎ) ಮತ್ತು ಲೈಕಾ ಟಿಸಿಎಸ್ ಎಸ್‌ಪಿಇ ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ ಬಳಸಿ ಫ್ಲಾಟ್ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ.ಪ್ರತಿ ಇಮ್ಯುನೊಸ್ಟೈನಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಕನಿಷ್ಠ ಎರಡು ರೂಪಾಂತರಿತ ಭ್ರೂಣಗಳ ಸಿರೊಸೆಕ್ಷನ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಮೂರು ಸ್ವತಂತ್ರ ಪ್ರಯೋಗಗಳಾಗಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು.ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಪ್ರಯೋಗವನ್ನು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ RIPA ಬಫರ್ (20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1% NP-40, 130 mM NaCl, 10% ಗ್ಲಿಸರಾಲ್, 2 mM EDTA, ಮತ್ತು HALT ಪ್ರೋಟೀಸ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ (ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್, ಸೇಂಟ್ ಲೂಯಿಸ್) ನಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಕಾವುಕೊಡಲಾಗಿದೆ. ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ, ಲೈಸೇಟ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಜಿ ಮ್ಯಾಗ್ನೆಟಿಕ್ ಮಣಿಗಳಿಂದ (ಲೈಫ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್, ಕಾರ್ಲ್ಸ್‌ಬಾಡ್, ಸಿಎ) ಪೂರ್ವಭಾವಿಯಾಗಿ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ನಂತರ ರಾತ್ರಿಯಲ್ಲಿ 4 ° C ನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ. SPECC1L ಅಥವಾ IgG ಪ್ರೊಟೀನ್ ಜಿ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಮಣಿಗಳನ್ನು SPECC1L ಅನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಲು ಬಳಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಲು ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಮೇಲೆ ವಿವರಿಸಿದ -β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ ಪ್ರತಿಕಾಯ ತೋರಿಸಿರುವ ಸಹ-IP ಪ್ರಯೋಗಗಳು ನಾಲ್ಕು ಸ್ವತಂತ್ರ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಪ್ರತಿನಿಧಿಗಳಾಗಿವೆ.
ಕನ್ಸಾಸ್ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾನಿಲಯದ ವೈದ್ಯಕೀಯ ಕೇಂದ್ರದಲ್ಲಿ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ಕೇಂದ್ರಕ್ಕೆ ಸ್ಥಿರ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಅಥವಾ ಮೌಸ್ ಭ್ರೂಣದ ಅಂಗಾಂಶಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸಲಾಗಿದೆ.ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ, ಮಾದರಿಗಳನ್ನು EMbed 812 ರಾಳದಲ್ಲಿ (ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಸೈನ್ಸಸ್, ಫೋರ್ಟ್ ವಾಷಿಂಗ್ಟನ್, PA) ಎಂಬೆಡ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ, ರಾತ್ರಿಯಲ್ಲಿ 60 ° C ನಲ್ಲಿ ಪಾಲಿಮರೈಸ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಡೈಮಂಡ್ ಬ್ಲೇಡ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸುಸಜ್ಜಿತವಾದ Leica UC7 ಅಲ್ಟ್ರಾಮೈಕ್ರೋಟೋಮ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು 80 nm ನಲ್ಲಿ ವಿಭಾಗಿಸಲಾಗಿದೆ.100 kV Lab6 ಗನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸುಸಜ್ಜಿತವಾದ JEOL JEM-1400 ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಮಿಷನ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ದೃಶ್ಯೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಈ ಲೇಖನವನ್ನು ಹೇಗೆ ಉಲ್ಲೇಖಿಸುವುದು: ವಿಲ್ಸನ್, ಎನ್ಆರ್ ಮತ್ತು ಇತರರು.SPECC1L ನ ಕೊರತೆಯು ವಿಭಜಿತ ಕೀಲುಗಳ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಕಪಾಲದ ನರ ಕ್ರೆಸ್ಟ್ ಕೋಶಗಳ ಕಡಿಮೆ ಡಿಲಾಮಿನೇಷನ್ಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.ವಿಜ್ಞಾನ.6, 17735;doi:10.1038/srep17735 (2016).
ಸೇಂಟ್-ಜೀನ್ನೆ, ಜೆ.-ಪಿ.ನರ ಕ್ರೆಸ್ಟ್ನ ಇಂಡಕ್ಷನ್ ಮತ್ತು ವ್ಯತ್ಯಾಸ.(ಸ್ಪ್ರಿಂಗರ್ ಸೈನ್ಸ್ + ಬಿಸಿನೆಸ್ ಮೀಡಿಯಾ; ಲ್ಯಾಂಡೆಸ್ ಬಯೋಸೈನ್ಸ್/ಯುರೆಕಾಹ್.ಕಾಮ್, 2006).
ಕಾರ್ಡೆರೊ, ಡಿಆರ್ ಮತ್ತು ಇತರರು.ಚಲನೆಯಲ್ಲಿರುವ ಕ್ರೇನಿಯಲ್ ನ್ಯೂರಲ್ ಕ್ರೆಸ್ಟ್ ಕೋಶಗಳು: ಕ್ರ್ಯಾನಿಯೊಫೇಶಿಯಲ್ ಬೆಳವಣಿಗೆಯಲ್ಲಿ ಅವರ ಪಾತ್ರ.ಅಮೇರಿಕನ್ ಜರ್ನಲ್ ಆಫ್ ಮೆಡಿಕಲ್ ಜೆನೆಟಿಕ್ಸ್.ಭಾಗ A 155A, 270–279, doi:10.1002/ajmg.a.33702 (2011).
ಬೋಲ್ಯಾಂಡ್, ಆರ್ಪಿ ನ್ಯೂರೋಕ್ರಿಸ್ಟೋಪಾಥಿಯಾ: 20 ವರ್ಷಗಳಲ್ಲಿ ಅದರ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ಅಭಿವೃದ್ಧಿ.ಮಕ್ಕಳ ತಜ್ಞ.ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರ.ಪ್ರಯೋಗಾಲಯ.ಔಷಧಿ.17, 1–25 (1997).
ಮ್ಯಾಂಗೋಲ್ಡ್ ಇ., ಲುಡ್ವಿಗ್ ಕೆಯು ಮತ್ತು ನೋಟೆನ್ ಎಂಎಂ ಒರೊಫೇಶಿಯಲ್ ಸೀಳುಗಳ ತಳಿಶಾಸ್ತ್ರದಲ್ಲಿ ಬ್ರೇಕ್ಥ್ರೂ.ಮಾಲಿಕ್ಯುಲರ್ ಮೆಡಿಸಿನ್ 17, 725–733, doi:10.1016/j.molmed.2011.07.007 (2011) ನಲ್ಲಿನ ಪ್ರವೃತ್ತಿಗಳು.
ಮಿನು, ಎಂ. ಮತ್ತು ರಿಲೆ, ಕ್ರೇನಿಯಲ್ ನ್ಯೂರಲ್ ಕ್ರೆಸ್ಟ್ ಸೆಲ್ ವಲಸೆ ಮತ್ತು ಕ್ರ್ಯಾನಿಯೊಫೇಶಿಯಲ್ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ವಿನ್ಯಾಸದ FM ಆಣ್ವಿಕ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳು.ಅಭಿವೃದ್ಧಿ 137, 2605–2621, doi: 10.1242/dev.040048 (2010).
ಡಿಕ್ಸನ್, ಎಮ್ಜೆ, ಮರಾಜಿಟಾ, ಎಮ್ಎಲ್, ಬೀಟಿ, ಟಿಎಚ್ ಮತ್ತು ಮುರ್ರೆ, ಜೆಕೆ ಸೀಳು ತುಟಿ ಮತ್ತು ಅಂಗುಳಿನ: ಅನುವಂಶಿಕ ಮತ್ತು ಪರಿಸರ ಪ್ರಭಾವಗಳನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳುವುದು.ನೈಸರ್ಗಿಕ ಕಾಮೆಂಟ್.ಜೆನೆಟಿಕ್ಸ್ 12, 167–178, doi: 10.1038/nrg2933 (2011).
ಇಂಗ್ರಾಮ್, ಸಿಆರ್ ಮತ್ತು ಇತರರು.ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್-ನಿಯಂತ್ರಕ ಅಂಶ-6 (Irf6)-ಕೊರತೆಯ ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ ಚರ್ಮ, ಕೈಕಾಲುಗಳು ಮತ್ತು ಕ್ರ್ಯಾನಿಯೊಫೇಶಿಯಲ್ ಪ್ರದೇಶದ ಅಸಹಜ ಮಾರ್ಫೋಜೆನೆಸಿಸ್.ರಾಷ್ಟ್ರೀಯ ಜೆನೆಟ್.38, 1335–1340, doi: 10.1038/ng1903 (2006).
ಪೆಯಾರ್ಡ್-ಜಾನ್ವಿಡ್, ಎಂ. ಮತ್ತು ಇತರರು.GRHL3 ನಲ್ಲಿನ ಪ್ರಬಲ ರೂಪಾಂತರಗಳು ವ್ಯಾನ್ ಡೆರ್ ವಾರ್ಡ್ ಸಿಂಡ್ರೋಮ್‌ಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಮೌಖಿಕ ಪೆರಿಡರ್ಮ್‌ನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುತ್ತವೆ.ಆಮ್ ಜೆ ಹಮ್ ಜೆನೆಟ್ 94, 23–32, doi: 10.1016/j.ajhg.2013.11.009 (2014).
ಹ್ಯಾರಿಸ್, ಎಮ್‌ಜೆ ಮತ್ತು ಜುರಿಲೋಫ್, ಡಿಎಮ್ ನ್ಯೂರಲ್ ಟ್ಯೂಬ್ ಮುಚ್ಚುವಿಕೆಯಲ್ಲಿ ದೋಷಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಮೌಸ್ ಮ್ಯಟೆಂಟ್‌ಗಳ ಪಟ್ಟಿಯನ್ನು ನವೀಕರಿಸಿ ಮತ್ತು ನರ ಕೊಳವೆಯ ಮುಚ್ಚುವಿಕೆಯ ಸಂಪೂರ್ಣ ಆನುವಂಶಿಕ ತಿಳುವಳಿಕೆಯತ್ತ ಸಾಗುತ್ತಾರೆ.ಜನ್ಮ ದೋಷಗಳ ತನಿಖೆ.ಭಾಗ A, ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಮತ್ತು ಮಾಲಿಕ್ಯುಲರ್ ಟೆರಾಟಾಲಜಿ 88, 653–669, doi: 10.1002/bdra.20676 (2010).
Fantauzzo, KA & Soriano, P. PI3K-ಮಧ್ಯಸ್ಥ PDGFRalpha ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ p53-ಅವಲಂಬಿತ ಅಂತರ್ಜೀವಕೋಶದ ಮಾರ್ಗದ ಮೂಲಕ ಅಸ್ಥಿಪಂಜರದ ಬೆಳವಣಿಗೆಯಲ್ಲಿ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಸರಣವನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ.ಜೀನ್ ಡೆವಲಪ್ಮೆಂಟ್ 28, 1005–1017, doi: 10.1101/gad.238709.114 (2014).
ಕಾಪ್, ಎಜೆ, ಗ್ರೀನ್, ಎನ್‌ಡಿ ಮತ್ತು ಮುರ್ಡೋಕ್, ಜೆಎನ್ ಡಿಶೆವೆಲ್ಡ್: ನರ ಕೊಳವೆಯ ಮುಚ್ಚುವಿಕೆಗೆ ಒಮ್ಮುಖ ವಿಸ್ತರಣೆಯ ಸಂಬಂಧ.ನರವಿಜ್ಞಾನದಲ್ಲಿ ಪ್ರವೃತ್ತಿಗಳು.26, 453–455, doi: 10.1016/S0166-2236(03)00212-1 (2003).